牛疱疹病毒Ⅰ型的分离鉴定和US3蛋白对Akt和MAPK信号调控的研究

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牛疱疹病毒1型(Bovine herpesvirus type1,BoHV-1)是传染性牛鼻气管炎(Infectious bovine rhinotracheitis,IBR)的病原体。BoHV-1感染的临床症状主要表现为黏膜炎,繁殖障碍和上呼吸道炎症。BoHV-1感染后引起的免疫抑制易导致其他病原继发感染,也可引起牛呼吸道疾病综合征(Bovine respiratory diseas complex,BRDC),最终导致高的死亡率。该病毒广泛分布于世界各地给养牛业带来了巨大的经济损失,据相关血清学研究报道发现该病在中国广泛流行,然而相关病毒分离报道较少。该病毒可以通过牛精液传播,BoHV-1污染的商品牛精液能促进该病毒的传播,但是我国商品化牛精液中BoHV-1污染状况并不清楚。本研究中,我们首次报道从75份商品化种牛精液样品中分离到两株BoHV-1,分别命名为NJ16-1和NJ16-2。通过在MDBK细胞上形成CPE,Western blot检测病毒蛋白VP16,PCR检测BoHV-1gB基因以及gB核苷酸序列检测分析均表明,从牛精液样品中分离到的病毒是BoHV-1病毒,两株分离株的gB基因序列与BoHV-1Cooper强毒株同源性达到99%以上,由此可以推测该分离株为强毒株,其致病性有待研究。  我们已报道发现BoHV-1感染可以激活p38MAPK、JNK和Akt信号,但是其激活机制并不清楚。BoHV-1US3基因编码一个丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,可以通过磷酸化调控细胞内的效应蛋白。本研究通过利用US3蛋白以及US3突变体研究US3蛋白对于p38MAPK、JNK和Akt信号的调控作用。本研究,我们发现在293T细胞上瞬时转染表达病毒US3蛋白可以导致p38MAPK和Akt信号的激活,并增加p38MAPK和Akt本底表达水平,但是却抑制了JNK信号。US3L265P点突变使US3表达水平下降,但增加US3刺激p38MAPK和Akt信号的能力。所以BoHV-1US3在p38MAPK和Akt信号通路激活中发挥重要作用。
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