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目的本课题旨在研究miR-320对人AB-BMSCs(alveolar bone-derived mesenchymal stem cells)成骨增殖分化的影响,并分析其对成骨相关基因表达的影响,为阐明牙槽骨重建的分子机制提供基础依据。方法1采用组织块培养法培养人AB-BMSCs,并采用免疫细胞荧光染色对ABBMSCs进行细胞鉴定。2将miR-320 mimics瞬时转染AB-BMSCs,24 h后采用CCK-8法、微量酶标法、茜素红染色法检测细胞增殖活性、细胞内ALP蛋白活性、成骨能力的变化;RT-q PCR检测成骨相关基因HOXA10、Runx2、BGP、COL-I、ALP的m RNA表达水平。3将miR-320 inhibitor瞬时转染AB-BMSCs,24 h后采用CCK-8法、微量酶标法、茜素红染色法检测细胞增殖活性、细胞内ALP蛋白活性、成骨能力的变化;RT-q PCR检测成骨相关基因HOXA10、Runx2、BGP、COLI、ALP的m RNA表达水平。结果1成功培养出人AB-BMSCs,显微镜观察细胞为长梭形,与BMSCs(bone marrow mesenchymal stem cells)的形态相似。免疫荧光法检测结果为CD34呈现出阴性表达,CD44、CD90呈现出阳性表达。2 AB-BMSCs成功过表达miR-320 24 h后,细胞增殖活性降低(P<0.01)、细胞内ALP活性降低(P<0.01)、钙结节形成减少(P<0.01);成骨相关基因HOXA10、Runx2、BGP、COL-I、ALP m RNA表达水平均有明显的下降趋势(分别为:P<0.01,P<0.01,P<0.05,P<0.01,P<0.01)。3 AB-BMSCs敲低miR-320 24 h后,钙结节形成增加(P<0.01),细胞增殖活性无明显差异(P>0.05)、细胞内ALP活性无明显差异(P>0.05);HOXA10、Runx2、BGP m RNA表达水平均有明显的上升趋势(分别为:P<0.01,P<0.01,P<0.01),COL-I、ALP m RNA水平无差异(分别为:P>0.05,P>0.05)。结论1体外培养的人牙槽骨来源的BMSCs符合BMSCs的特征。2 miR-320负向调控AB-BMSCs细胞的增殖和成骨分化能力,部分是由于其负向调控细胞ALP蛋白活性及细胞矿化能力,以及负向调控部分成骨相关基因的表达。