【摘 要】
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首先,参考Hartingsveldt已发表的NRRL3135植酸酶(phyA)基因序列,设计并合成了一对引物,应用PCR技术,分别以黑曲霉NRRL3135和土曲霉CCTCCAF93044总DNA为模板,分别扩增出了不包
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首先,参考Hartingsveldt已发表的NRRL3135植酸酶(phyA)基因序列,设计并合成了一对引物,应用PCR技术,分别以黑曲霉NRRL3135和土曲霉CCTCCAF93044总DNA为模板,分别扩增出了不包括假定的信号肽序列,并推导了其氨基酸序列.其中,土曲霉植酸酶基因全长为1377bp,与已发表的NRRL3135的phyA基因的同源性为97﹪,编码一个含459个氨基酸的蛋白质.参考Pasamontes已发表的烟曲霉植酸酶(phyA)基因序列,设计PCR引物,以烟曲霉CCTCCAF93044总DNA为模板扩增出了相应的植酸酶基因.同样将其克隆到pMD18-T载体上,测定了其核苷酸序列,并推导了其氨基酸序列.该基因全长1368bp,编码一个含456个氨基酸的蛋白质.然后将土曲霉植酸酶基因克隆到啤酒酵母表达pYFD59上,构建了质粒pHBM404,将此质粒导入啤酒酵母,得到阳性转化子.将烟曲霉植酸酶基因克隆到诱导型毕赤酵母表达载体pPIC9K上,构建了质粒pHBM108,将此质粒pHBM108导入毕赤酵母,得到阳性转化子,用SDS-PAGE凝胶电泳进行了验证,并测定了其酶活.
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