Aurora-A高表达对肿瘤血管生成的影响及机制研究

来源 :山西医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chenjianhao2009
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目的:1.构建Aurora-A基因高表达的稳定细胞系及对照细胞系;2.检测Aurora-A高表达对体内肿瘤生长的影响;3.检测Aurora-A高表达对体内外血管生成的影响;4.检测Aurora-A高表达对VEGFR-2表达的影响。方法:1.利用脂质体介导将绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein,GFP)标记Aurora-A的真核表达质粒转染人食管癌细胞株KYSE150,通过Westernblot及免疫荧光鉴定Aurora-A高表达稳定细胞系构建是否成功;2.将Aurora-A高表达细胞系及对照组细胞接种于裸鼠腋部皮下,构建裸鼠荷瘤模型,观察Aurora-A高表达对体内肿瘤生长的影响;3.采用小管形成及鸡胚尿囊膜实验分析体内外Aurora-A高表达对血管生成的影响;采用免疫组化法研究Aurora-A高表达对裸鼠移植瘤中微血管密度(microvesseldensity,MVD)的影响;4.采用Westernblot,研究Aurora-A高表达对食管鳞癌细胞中VEGFR-2及p-VEGFR-2表达的影响。结果:1.利用脂质体介导的重组质粒转染入KYSE150细胞,Westernblot的灰度分析结果显示,Aurora-A高表达组中Aurora-A蛋白的总表达量约为阴性对照组的2.5倍,提高了Aurora-A在细胞中的表达水平,成功构建了Aurora-A高表达的稳定细胞系;免疫荧光结果显示,GFP标记的Aurora-A主要定位于中心体及纺锤体上,Aurora-A异常高表达使得细胞中心体数目增多,与文献报道一致,进一步说明Aurora-A高表达的稳定细胞系构建成功;2.通过裸鼠肿瘤生长曲线发现,与阴性对照组相比,Aurora-A高表达组的肿瘤生长速度快,肿瘤体积较大,表明Aurora-A高表达可以促进体内的肿瘤生长;3.小管生成实验表明,Aurora-A高表达组生成的血管数量为26±1.79,明显高于阴性对照组的血管数量13.6±1.31,两者差异有统计学意义(t=4.238,P<0.01),表明Aurora-A高表达可以促进体外血管生成;4.鸡胚尿囊膜实验表明,与阴性对照组生成的血管数量23.33±1.76相比,Aurora-A高表达组生成的血管数量为38±2.31,差异有统计学意义(t=5.047,P<0.01),表明Aurora-A高表达可以促进体内血管生成;5.免疫组化结果表明,Aurora-A高表达组中的MVD值为45±2.12,阴性对照组为30.2±1.65,两者差异有统计学意义(t=4.795,P<0.01),表明Aurora-A高表达可以促进裸鼠肿瘤中的微血管生成;6.Westernblot结果表明与阴性对照组相比,Aurora-A高表达组中p-VEGFR-2的表达量增加约1.5倍,差异具有统计学意义(t=8.086,P<0.01)。而Aurora-A高表达组与阴性对照组中VEGFR-2蛋白的表达无明显差异,二者无统计学差异(t=0.472,,P>0.05),表明Aurora-A高表达上调了p-VEGFR-2的表达水平,进一步说明,Aurora-A可以通过活化VEGFR-2促进血管生成。结论:1.成功构建了Aurora-A高表达稳定细胞系,并且Aurora-A高表达可以促进体内肿瘤生长;2.Aurora-A高表达可以促进食管鳞癌中的血管生成,其作用机制可能与活化VEGFR-2有关。
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