近二十年,两栖类种群数量呈全球性急剧减少趋势,研究表明传染病的产生和蔓延成为两栖类种群数量下降的主要原因。作为中国东北地区优势两栖物种,东北林蛙(Rana dybowskii)也正遭受着病原微生物的威胁,其中虹彩病毒科蛙虹彩病毒属(Ranavirus)是其中一重要因素。Toll样受体(Toll-like receptors, TLRs)信号通路作为固有免疫系统的重要组成部分,可以识别病原微生物所携带的模式分子(pathogen-associated molecular patterns, PAMP),进而启动固有免疫应答以及调控适应性免疫应答。MyD88是TLR信号通路中重要接头蛋白,被除TLR3之外其它所有TLRs共用。本研究应用cDNA末端快速扩增技术(rapid-amplification of cDNA ends, RACE)获得东北林蛙MyD88全长cDNA序列,通过生物信息学方法对东北林蛙MyD88进行了保守结构域查找(conserved domain research)、多序列比对(multiple sequence alignment)、同源性分析(homology analysis)、蛋白性质预测(protein properties prediction)以及进化树构建(phylogenetic tree construction)等分析,以期全面了解东北林蛙MyD88蛋白的生物信息,预测其可能发挥的免疫功能。然后,通过实时定量PCR技术检测在虹彩病毒(Rana grylio virus, RGV)胁迫下,东北林蛙MyD88及其下游关键分子IRAK4、TRAF6和TRAF3在心脏、肝脏、肾脏以及皮肤中的表达变化。RACE法获得了东北林蛙MyD88全长cDNA序列,生物信息学分析得到其cDNA全长为1472 bp,其中开放阅读框为855 bp,编码一个由285个氨基酸残基组成的蛋白,其蛋白包含有一个死亡结构域(death domain, DD)和一个Toll/白介素-1受体同源结构域(Toll/IL-1 receptor homologous region, TIR)结构域。生物信息学分析显示东北林蛙MyD88为亲水性蛋白,其分子量及等电点分别为32.79 kDa和6.00。多序列比对和同源性分析结果显示MyD88蛋白最保守部分位于DD和TIR结构域内,东北林蛙MyD88与两栖类同源分子一致性最高,其次为哺乳类。系统发育分析显示两栖类MyD88分子的系统发育关系与爬行类、鸟类及哺乳类较近,而与鱼类较远。实时荧光定量PCR结果显示在RGV感染后,东北林蛙MyD88 mRNA在肾脏、肝脏及心脏中的表达量呈明显上调,而其下游分子IRAK4 mRNA在上述四个器官中的表达量均呈明显上调,TRAF6 mRNA的表达仅在皮肤中呈明显上调,TRAF3 mRNA在除肾脏外的其它三个器官中呈明显上调。研究结果表明,TLR信号通路中两个重要分子MyD88和IRAK4都参与了东北林蛙机体抗病毒的免疫过程,TRAF3介导的IRF信号通路发挥着较TRAF6介导的NF-κB信号通路更重要的作用。本研究首次获得了东北林蛙TLR信号通路中接头蛋白MyD88全长cDNA序列,并对虹彩病毒胁迫下通路中关键分子MyD88及其下游分子IRAK4、TRAF6和TRAF3的时空表达变化进行了分析,为进一步了解两栖类固有免疫系统提供了研究基础。