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孔雀石绿是一种合成的有毒三苯基甲烷类化合物，因具有预防和治疗水产动物真菌性疾病的作用，且价格低廉操作方被便，广泛使用在水产养殖，临床试验研究表明孔雀石绿对动物器官具有高毒性、高残留、致畸、致癌、致突变的副作用，因此研究一种能够快速检测孔雀石绿的ELISA方法，对水产品的安全检查具有一定的实际意义。本研究在分析孔雀石绿分子结构和免疫原性的基础上，合成羧基化孔雀石绿半抗原，半抗原与载体蛋白偶联合成孔雀石绿人工抗原，用人工抗原免疫兔子获得孔雀石绿多克隆抗体，将孔雀石绿多克隆抗体进行纯化后用于间接ELISA并对其条件进行优化，从而建立间接ELISA快速检测孔雀石绿的方法，主要研究结果如下：1.通过化学方法，由原料4-甲酰基苯甲酸和N,N-二甲基苯胺合成羧基化隐色孔雀石绿（CLMG），再将其氧化生成羧基化孔雀石绿（CMG），分别采用活性酯法和碳二亚胺法偶联羧基化孔雀石绿（CMG）获得人工免疫原（CMG-BSA）和人工包被原（CMG-OVA），利用紫外分光光度法测得半抗原与载体蛋白偶联比分别为13.8：1（CMG-BSA）和17.1：1（CMG-OVA）。2.用免疫原（CMG-BSA）免疫动物，第4次免疫后用间接ELISA法初步测定兔子抗血清效价为1：3500，抗血清IC50值为40.44ng/mL。3.通过辛酸-硫酸铵法对免疫血清进行纯化处理，经SDS-PAGE，表明纯化后的多克隆抗体纯度较高，通过紫外分光光度法测定纯化后的多克隆抗体浓度为11.02mg/mL。通过方阵滴定法确定包被原和纯化抗体的最佳稀释倍数分别为1：1000，1：8000。4.在此基础上对包被溶液的选择、包被条件、封闭溶液的选择、封闭条件、竞争时间、MG标准溶液与多克隆抗体体积比及抗体稀释液进行优化，经过条件优化后重新建立MG标准曲线，获得标准曲线方程y=-42.44x+71.08，R2=0.985。经计算MG的半数抑制率IC50为:3.2ng/mL，检测限(IC90)可达0.35ng/mL。孔雀石绿与结构类似物隐色孔雀石绿（LMG）、结晶紫（CV）、隐色结晶紫（LCV）的交叉反应率分别为13.3%、100%、11.4%，鱼肉及水质样品回收率均在70%以上，回收率高，变异系数均在10%以下，重复性高，为孔雀石绿ELISA快速检测试剂盒的开发奠定了基础。