论文部分内容阅读
目的： 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)是细胞内许多重要的信号转导通路的枢纽，其参与人体内多种生理和病理过程，例如细胞的增殖、调控细胞周期、细胞的迁移、血管的新生等。mTOR相关信号通路的异常激活与肿瘤的发生、发展紧密相关。本实验研究雷帕霉素(RAPA)对伯基特淋巴瘤细胞株Raji中mTOR、MMP-2、MMP-9表达水平的影响，探讨RAPA在伯基特淋巴瘤细胞株Raji转移方面的作用及相关作用机制，为RAPA应用于临床治疗伯基特淋巴瘤提供相关理论依据。 方法： 以伯基特淋巴瘤细胞株Raji为实验对象。 1.应用Transwell迁移实验：检测不同浓度RAPA作用于Raji细胞18h后，对其迁移能力产生的影响。 2.应用蛋白质印迹(western blot)法检测不同浓度RAPA作用于Raji细胞72h后，各组细胞中mTOR、MMP-2、MMP-9蛋白的表达情况。 3应用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR，qPCR)技术检测不同浓度RAPA作用于Raji细胞24h、48h、72h后,各组细胞中mTOR、MMP-2、MMP-9的mRNA表达情况。 结果： 1.Transwell迁移实验检测不同浓度RAPA作用18h后对Raji细胞迁移的影响：0.1nmol/LRAPA作用Raji细胞18h后迁移至下室细胞数少于无RAPA的空白组（7.4±2.3对9.7±3.1，P＜0.05）。1nmol/L RAPA处理Raji细胞18h后迁移至下室细胞数少于0.1nmol/LRAPA组（3.7±0.36对7.4±2.3，P＜0.05）； 2.Western blot实验结果显示：不同浓度（0nmol/l,10nmol/L、50nmol/L、100nmol/L、250nmol/L、500nmol/L）RAPA作用Raji细胞72h后，测定mTOR蛋白的相对表达量依次为(1.49±0.12)、(1.21.±0.11)、(1.12±0.07)、(0.99±0.05)、(0.44±0.03)、(0.15±0.02)。MMP-2蛋白的相对表达量依次为(0.53±0.03)、(0.41±0.02)、(0.30±0.02)、(0.25±0.02)、(0.23±0.03)、(0.18±0.03)。MMP-9蛋白的相对表达量依次为(0.78±0.05)、(0.66±0.03)、(0.55±0.04)、(0.32±0.02)、(0.26±0.03)、(0.23±0.02)。β-actin的蛋白表达情况在各组中无明显差别。与空白对照组相比，RAPA处理组中mTOR、MMP-2、MMP-9的蛋白表达量均被抑制(P＜0.05)，伴随RAPA药物浓度的增加，三种蛋白的表达量情况呈下降趋势，存在统计学差异(P＜0.05)。 3.qPCR结果显示：不同浓度（0nmol/l,10nmol/L、50nmol/L、100nmol/L、250nmol/L、500nmol/L）RAPA处理Raji细胞24h后，mTOR基因表达分别为(0.95±0.03)、(0.82±0.02)、(0.73±0.01)、（0.62±0.05)、（0.53±0.02)；MMP-2基因表达分别为(0.44±0.02)、（0.34±0.06)、（0.31±0.05)、(0.24±0.04)、（0.16±0.01）；MMP-9基因表达分别为(0.93±0.03)、(0.89±0.05)、(0.81±0.04)、(0.72±0.07)、（0.45±0.03）；不同浓度（0nmol/l,10nmol/L、50nmol/L、100nmol/L、250nmol/L、500nmol/L）RAPA处理Raji细胞48h后，mTOR基因表达分别为(0.85±0.05)、(0.69±0.08)、(0.60±0.03)、（0.49±0.04)、（0.36±0.01)；MMP-2基因表达分别为（0.26±0.03）、（0.11±0.01）、（0.09±0.01）、（0.08±0.01）、（0.07±0.01）；MMP-9基因表达分别为（0.60±0.02）、（0.39±0.01）、（0.30±0.05）、（0.22±0.01）、（0.17±0.01）；不同浓度（0nmol/l,10nmol/L、50nmol/L、100nmol/L、250nmol/L、500nmol/L）RAPA处理Raji细胞72h后，mTOR基因表达分别为(0.91±0.06)、(0.76±0.06)、(0.67±0.05)、（0.56±0.01)、（0.42±0.03)；MMP-2基因表达分别为（0.57±0.03）、（0.48±0.05）、（0.43±0.03）、（0.40±0.02）、（0.10±0.01）；MMP-9基因表达分别为（0.84±0.03）、（0.71±0.02）、（0.44±0.04）、（0.40±0.03）、（0.27±0.01）。mTOR、MMP-2、MMP-9的mRNA表达情况，伴随RAPA药物浓度的增加均呈下降趋势。（P＜0.05）。 结论： 体外RAPA可以显著抑制伯基特淋巴瘤细胞株Raji的迁移能力，降低Raji细胞内mTOR、MMP-2、MMP-9的蛋白及mRNA的表达量，RAPA为哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的抑制剂，说明mTOR与MMP-2、MMP-9之间可能存在相关信号通路，mTOR可以通过这些通路调节MMP-2、MMP-9的表达量，从而影响伯基特淋巴瘤细胞的转移。