超声辐照对培养的血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

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目的:观察超声波的声强、频率、照射时间三因素不同水平对体外培养的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和凋亡的影响,筛选用于防止介入治疗后血管再狭窄的较理想的超声辐照参数, 并对其生物学效应的机理作初步探讨。方法:单声源压电陶瓷超声辐照系统声强连续可调。以工作频率0.705MHz,2.170MHz,5.700MHz,强度0.5 W/㎝~2,1.0 W/㎝~2,2.0W/㎝~2辐照体外培养的VSMCs,台盼蓝排斥实验分析不同条件超声辐照后即刻细胞存活率, 以此为基础, 利用MTT比色法描述不同条件超声辐照后5天VSMCs的生长动力学变化,得出较理想的辐照条件;用BrdU掺入法检测超声辐照对VSMCs S期DNA复制的影响;ELISA法检测不同条件辐照后4hr VSMCs凋亡情况。结果:1. 超声辐照对培养的血管平滑肌细胞有直接杀伤作用,该作用随辐照强度和辐照时间的增加而增加,相同辐照强度和时间下,低频超声该作用更显著。0.705MHz,0.5W/cm~2, 5min组与对照组相比存活率为0.977±0.021 vs 0.9970.006,P>0.05;<WP=7>2.17MHz,2.0W/㎝~2,0.5min组与对照组相比存活率为0.583±0.047 vs 0.9970.006, P<0.05。2. MTT法测定细胞生长曲线: 超声辐照组较对照组VSMCs生长曲线平缓, 0.705MHz组以0.5W/cm2, 5min辐照最为明显,实验第5天辐照组与对照组O.D值分别为0.313±0.011,0.639±0.013, P<0.05。3. BrdU掺入法测定S期细胞增殖的结果:0.705MHz,0.5W/cm~2, 5min超声辐照组BrdU阳性细胞率低于对照组(40.56.8% vs 55.83.3%, P<0.05)。4. ELISA检测发现0.705MHz,0.5W/cm~2, 5min超声辐照的凋亡富积因子(enrichment factor)与阳性对照相比为 1.851±0.087 vs 1.924±0.074,P=0.836>0.05。结论:一定剂量的超声辐照对培养的VSMCs有明显的杀伤作用。在本实验设置的辐照参数中,0.705MHz,0.5W/cm~2, 5min超声辐照在无明显杀伤细胞的情况下能较好地抑制培养的VSMCs生长,一定程度上阻止S期DNA复制。实验发现并非辐照强度越强,时间越长,超声诱导凋亡的作用越显著,这可能与细胞发生死亡而非凋亡有关。本研究提示USE是一种潜在的治疗血管增殖性疾病的手段。
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