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利用蚕胚胎期的温敏性状,可以通过环境条件与基因互作的效应,控制单一性别蚕的孵化,为此,科学工作者对温敏性的遗传进行了一系列的研究,但至今尚未完全揭开温敏致死的遗传作用机理。本研究以限伴作为研究材料,利用双向电泳、图像分析、质谱以及数据库检索技术,分别对高温干燥催青和常温常湿催青处理蚕卵蛋白,以及黑蚁和赤蚁的蚁蚕总蛋白进行了差异蛋白质组分的分析,并利用SDS-PAGE对温敏致死品种雌雄五龄蚕血清进行研究,探索蚕胚胎伴性温敏性差异的分子机理,获得了如下的主要结果:
1.提取在不同环境条件催青至转青期的蚕卵易溶蛋白,进行双向电泳分析,常温常湿催青共检测到420个蛋白斑点,高温干燥催青处理共检测到429个,匹配率83.16%。常温催青处理特异性蛋白斑点67个,匹配蛋白点中蛋白含量高于高温干燥处理3倍以上的蛋白斑点有18个;高温干燥催青处理特异性蛋白斑点76个,匹配点中蛋白含量高于常温常湿处理的蛋白斑点有35个。
2.转青期的蚕卵难溶蛋白经双向电泳分析,常温常湿催青共检测到227个蛋白斑点,高温干燥催青处理共检测到225个点,匹配率84.96%。常温催青处理特异性蛋白斑点35个,匹配蛋白点中蛋白含量高于高温干燥处理3倍以上的蛋白斑点有19个;高温干燥催青处理特异性蛋白斑点33个,匹配点中蛋白含量高于常温常湿催青处理3倍以上的蛋白斑点有30个。
3.对正常催青处理至孵化的蚁蚕易溶蛋白,进行双向电泳分析,赤蚁共检测到269个蛋白斑点,黑蚁检测到250个,匹配率86.71%。赤蚁中特异性蛋白斑点有43个,匹配点中有23个蛋白斑点的含量高于黑蚁3倍以上;黑蚁中特异性蛋白斑点有17个,匹配点中有10个蛋白斑点的含量高于赤蚁3倍以上。
4.蚁蚕难溶蛋白经双向电泳分析,赤蚁共检测到370个蛋白斑点,黑蚁检测到424个,匹配率80.10%。赤蚁中特异性蛋白斑点52个,匹配点中有52个蛋白点的含量高于黑蚁3倍以上;黑蚁中特异性蛋白斑点有106个,匹配点中有53个蛋白斑点的含量高于赤蚁3倍以上。
5.切取高温干燥催青处理中出现的特异蛋白斑点852,进行MALDI-TOF-TOF分析,经检索匹配认为是一种泛素类蛋白。
6.切取赤蚁难溶蛋白中出现的特异蛋白斑点741,进行LC-TOF-TOF分析,通过NCBI搜索匹配,与最相近的生长促进类蛋白只有2.04%的匹配率,可能是一种新蛋白。
7.五龄血清经SDS-PAGE分析,雌雄图谱均共分离到25个分子量不同的蛋白组分,其中有分子量为137kD的蛋白组分雌蚕在前期存在,但到第7天时消失,分子量为80.2 kD的蛋白组分雌蚕在第6天产生,雄蚕在第7天才出现,分子量为34.9kD的蛋白组分雌雄蚕分别在五龄第5天和第4天才表达出现;雄蚕分子量为57.9kD和37.9 kD的2个蛋白组分在五龄第5天和第7天消失,雌蚕该蛋白则始终存在。