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乙型肝炎病毒(HepatitisBvirus，HBV)是非直接致细胞病变病毒，可导致慢性肝炎、肝硬化和原发性肝癌。乙型肝炎的发病机理，主要是HBV感染后机体在清除HBV同时引起肝细胞损伤的一种免疫病理反应，细胞毒性T淋巴细胞(CytotoxicTLymphocytes，CTL)在病毒清除和肝细胞损伤中可能起关键的作用。HBV感染肝细胞后，病毒抗原被抗原提呈细胞(antigenpresentingcell，APC)的蛋白酶裂解成小分子的寡肽，并与肝细胞内人白细胞Ⅰ类抗原(HumanLeukocyteAntigen-Ⅰ，HLA-Ⅰ)分子结合成复合物，表达于细胞表面，成为T细胞表位。CTL通过表面的CD8+分子与HLA-Ⅰ类分子产生粘附，并由T细胞抗原受体(Tcellantigenreceptor，TCR)识别上述寡肽表位，此类CTL即为HBV抗原特异性CTL。目前已鉴定出多个受HLA-Ⅰ类分子限制的HBV不同抗原区段的CTL表位，如核心区(corel8-27)、聚合酶区(polymerase575-583)及包膜区(envelope335-343)等表位。目前认为抗原特异性CTL作用的机制可能为先识别HBV感染肝细胞表面相应的表位，然后发挥以下两种抗病毒作用：其一是直接杀伤部分HBV感染肝细胞，在清除病毒的同时也导致肝细胞的裂解；其二是分泌内源性γ干扰素(γ-interferon，γ-IFN)等细胞因子，后者通过非溶细胞的机制清除肝细胞中的病毒。进一步研究发现，急性乙型肝炎(acutehepatitisB，AHB)体内存在多特异性的和多克隆的CTL，能识别多个抗原表位，识别范围广，应答作用强。而慢性乙型肝炎(chronichepatitisB，CHB)患者体内的特异性CTL却很少，特异性CTL只能识别单一的抗原位点，应答范围窄而且能力弱，可能与清除病毒能力不足而导致慢性化有关。但CHB病情急性加重时可以检测到CTL细胞相应增加，同时常伴随有血清HBVDNA的波动和HBeAg血清学转换(HBeAg→抗-HBe)，并且可能获得控制病毒的效果。有研究认为CHB病情急性加重可能是受HLA-Ⅰ限制的针对HBV抗原的CTL作用的结果，免疫反应是CHB病情急性加重的主要原因。但由于CHB患者体内的特异性CTL很少及检测手段的限制，抗原表位特异性CTL在CHB急性发作及发展为肝功能衰竭中的作用尚不清楚。
近年抗原特异性CTL检测技术有了较大的进展，出现了更为特异、敏感和快速的检测技术，如可溶性-组织相容性复合物(Majorhistocompatibilitycomplex，MHC)肽四聚体(Tetramers)法，该方法结合流式细胞术可直接检测外周血或者肝组织内特异性CD8+T细胞数量，避免了体外培养技术存在的诸多外界条件影响因素，更真实地反映了体内特异性CD8+T细胞的实际情况。另由于CHB特异性CTL只能识别较单一的抗原位点，有研究证实主要是识别HBV核心区(core18-27)表位，故我们选择检测针对HBV核心区(core18-27)表位的抗原特异性CTL。因此，本研究采用Tetramers法基础上进一步改良的MHC五聚体法(Pro5TMMHCPentamers)结合流式细胞技术检测CHB患者体内的核心抗原表位特异性CTL细胞，试图阐明抗原表位特异性CTL细胞在CHB肝损伤和病毒清除中的作用及病情急性加重的免疫发病机制，为新的抗病毒治疗手段，如治疗性疫苗、免疫活性细胞过继治疗等提供理论基础和评价方法。
本课题研究：①采用MHC五聚体法结合流式细胞技术检测CHB患者外周血抗原特异性CTL细胞，并分析其与肝损害和病毒载量的关系；②分析CHB急性发作与抗原特异性CTL细胞水平的关系，并通过CHB急性发作发展为重型肝炎与未发展为重型肝炎抗原特异性CTL细胞水平的比较，了解抗原特异性CTL细胞在重型肝炎发病机制中的作用；③动态检测部分患者的抗原特异性CTL水平、肝功能、HBVDNA定量及HBeAg血清学转换状况，了解抗原特异性CTL水平动态变化与肝功能及病毒载量变化的关系。