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骨骼肌卫星细胞亦称为肌肉干细胞，是位于骨骼肌肌纤维的肌膜和基底膜之间具有增殖、分化潜力的肌源性干细胞，其增殖与分化程度对骨骼肌纤维的数量起决定性作用，决定了出生后动物肌肉的产量。 microRNA(miRNA)是一种长度为21～25个核苷酸(nt)进化上高度保守的非编码小RNA片段，广泛参与了机体生长发育、细胞命运决定、细胞周期进程和细胞凋亡等生命过程的调控，在动物的生长、发育和疾病发生等过程中都起着重要的作用。研究表明在鼠的骨骼肌卫星细胞中，miR-27b能够靶向作用Pax3，调控卫星细胞的增殖和分化，在鼠的胚胎中过表达miR-27b能够抑制Pax3的表达使肌肉的生成减慢，造成胚胎死亡，说明miR-27b在骨骼肌的生长发育中起到重要的调控作用。 为了明确猪骨骼肌卫星细胞中miR-27b的作用靶基因及靶基因的功能，进一步确定miR-27b对猪的骨骼肌卫星细胞增殖的调控，本研究分析了猪骨骼肌卫星中Notch1介导的信号通路与miR-27b之间的相互调控关系；运用生物信息学的方法预测miR-27b可能的靶基因I-mfa，将预测的靶基因的3’-UTR序列克隆到pmirGLO载体上构建萤光素酶报告载体，与miR-27b过表达片段共转染293FT细胞以证实其靶点，同时在猪的骨骼肌卫星细胞中过表达miR-27b片段，定量和Western Blot检测靶基因I-mfa的表达，进一步证实二者的作用关系；转染miR-27b过表达和干扰片段，检测了骨骼肌卫星细胞细胞增殖和周期的变化，并在基因水平上检测肌卫星细胞生长发育相关基因I-mfa、MyoD、MyoG、CCNB1、CCND1、CCND2和P21的表达，在蛋白水平上检测肌卫星细胞生长发育相关蛋白MyoD、MyoG和CCND1的表达，初步分析miR-27b影响骨骼肌卫星细胞增殖的分子机理；将靶基因I-mfa在猪的骨骼肌卫星细胞中过表达，发现I-mfa能够使细胞悬浮。所得结果如下： 1、在Notch信号通路激活和干扰Notch1的猪的骨骼肌卫星细胞中，检测miR-27b的表达量发生显著性的改变，在猪的骨骼肌卫星细胞中过表达和干扰miR-27b，并没有检测到Notch1的表达量发生改变，表明Notch信号通路可以调控miR-27b的表达，但miR-27b不能通过调控Notch1影响信号通路。 2、RT-PCR检测发现I-mfa在猪的骨骼肌卫星细胞中表达，但在猪的成纤维细胞中表达量低或不表达。 3、双萤光素酶报告载体和猪骨骼肌卫星细胞中过表达miR-27b，证明在猪的骨骼肌卫星细胞中I-mfa是miR-27b的靶基因。 4、通过流式细胞仪检测和细胞计数检测，发现过表达miR-27b能够抑制细胞进入细胞周期，抑制其增殖；干扰miR-27b能够促进细胞进入细胞周期，促进细胞增殖，说明miR-27b能够调控猪的骨骼肌卫星细胞细胞周期的变化进而对增殖产生影响。 5、miR-27b对细胞增殖的调控机理，通过定量结果表明，miR-27b过表达后，靶基因I-mfa的表达量极显著降低(P<0.01)，MyoG极显著的升高(P<0.01)；MyoD、细胞周期蛋白CCND1和CCND2的表达量未发生显著变化，CCNB1表达量极显著的降低(P<0.01)，细胞周期的抑制蛋白P21的表达量极显著的升高(P<0.01)。干扰miR-27b后定量检测，靶基因I-mfa的表达量极显著升高(P<0.01)，而MyoG显著降低(P<0.05)；MyoD、细胞周期蛋白CCND1和CCND2的表达量都未发生显著变化，CCNB1表达量极显著的升高(p<0.01)，细胞周期的抑制蛋白P21的表达量极显著的降低(P<0.01)。Western Blot蛋白水平结果表明miR-27b过表达24h后靶基因I-mfa的表达量发生显著降低，MyoG蛋白的表达量显著升高，细胞周期蛋白CCND1的表达量显著降低；miR-27b干扰24h后靶基因I-mfa的表达量发生显著升高，MyoG蛋白的表达量显著降低，细胞周期蛋白CCND1的表达量显著升高，但是MyoD蛋白的表达量并不能随着miR-27b的变化而发生改变。表明miR-27b通过直接作用靶基因I-mfa，进而作用于MyoG的表达，进一步调控细胞周期蛋白CCNB1和CCND1，以及细胞周期抑制蛋白P21影响猪的骨骼肌卫星细胞增殖。 6、在猪的骨骼肌卫星细胞中，过表达I-mfa，荧光显微镜下观察发现骨骼肌卫星细胞中I-mfa的过表达导致贴壁的细胞出现悬浮。