双水相萃取技术是近年来发展起来的一种新型的生物化工分离技术,该技术具有生物相容性高,分离条件温和,分离步骤简单,易干放大,且不存在有机溶剂残留等优点。已广泛用于各类有效成分的提纯。 双水相体系内高浓度聚合物和盐的存在给系统内蛋白的测定带来了很大的干扰。本文通过对比几种蛋白浓度的测定方法:Lowry法,Bradford法和BCA法,最终确定Bradford法为体系内的蛋白测定方法。PEG的存在也干扰了SDS-PAGE凝胶电泳的扫描和分析。蛋白沉淀法,透析法和超率法分别用来尝试去除干扰,最终选定三氯乙酸沉淀法作为预处理方法,有效地消除了PEG对电泳带来的干扰。 人甲状旁腺激素具有促进骨再生的功效,对治疗人骨质疏松症有重要的意义。本文研究了大肠杆菌发酵生产的人甲状旁腺激素融合蛋白(Trx-hPTH)在双水相体系内的分配,考察了成相盐的种类,聚合物的分子量和浓度,成相盐的浓度,pH的变化等因素对蛋白分配的影响,并确定了Trx-hPTH在双水相体系内的最佳分配条件：体系组成16％的MgSO4和20％的PEG1000,pH值8.0。一步萃取后Trx-hPTH蛋白有初步的纯化效果,经多步萃取后可以去除大部分杂质得到较纯的蛋白条带。 另外,双水相体系因为能创造温和的生物活性环境而被用于复性方面的研究。重组抗人卵巢癌×抗人CD3双特异性抗体在药理试验上证明能有效介导效应细胞对肿瘤细胞的杀伤作用,可以用来治疗人卵巢癌。本文尝试了CD3包涵体在聚合物/聚合物以及聚合物/盐双水相体系内的复性研究。