本研究首先对采自安徽不同地区的感染马铃薯Y病毒（PVY）的烟草和马铃薯病样进行病毒株系的分子鉴定。再利用dsRNA技术,构建HC-Pro基因部分片段反向重复载体转化烟草,沉默外源侵染寄主的PVY沉默抑制子HC-Pro基因,在RNA水平上将HC-Pro基因的mRNA降解,使其不能表达发挥作用,从而提高转基因烟草的抗病毒RNA沉默效率。HC-Pro反向重复表达载体以农杆菌介导转化烟草,以获得能够稳定遗传的高抗或免疫PVY的转基因烟草。1.来自安徽不同寄主PVY分离物的血清学鉴定及其CP基因分子进化分析采集安徽不同地区感染马铃薯Y病毒（PVY）的烟草、马铃薯和番茄病样,部分病样的ELISA检测结果呈阳性。RT-PCR克隆4号样和7号样PVY的CP基因并测序。结果表明,来自烟草PVY的CP基因（PVY-CP-4）和来自马铃薯PVY的CP基因（PVY-CP-7）序列全长均为801 nts,编码267个氨基酸。构建PVY CP基因系统关系树及进行序列相似性比较,PVY-CP-4与PVY^O、PVY^N:O聚成一个分支,且与PVY^O（EF026074）的序列相似性最高,达99.4%,说明来源于安徽合肥烟草上的PVY应该属于PVY^O株系;而PVY-CP-7与PVY^N、PVY^NTN聚成另一分支,且与PVY^NTN（AJ890347）、PVY^NTN（EF026075）和PVY^NTN（AJ585342）的序列相似性最高,达98.3%,推测来源于安徽五河马铃薯上的PVY-CP-7可能属于PVY^NTN株系。2.侵染烟草的马铃薯Y病毒（PVY）HC-Pro基因的克隆及序列分析根据ELISA的检测结果,选择阳性反应强烈的4号样（烟草）,RT-PCR克隆PVY HC—Pro基因并测序。结果表明,来自烟草PVY的HC-Pro基因（HC-Pro-4）全长1359 bp,编码453个氨基酸,与PVY^N（AM268435）HC-Pro基因的核苷酸序列相似性最高,达99.0%。构建PVY HC-Pro-4与其它14个PVYHC-Pro基因的系统关系树,可以看出PVY HC-Pro-4与PVY^N（AM268435）的亲缘关系最近。HC-Pro基因的克隆为进一步研究抗病毒基因工程奠定了基础。3.马铃薯Y病毒部分辅助成分蛋白基因的反向重复植物表达载体构建根据PVY HC-Pro-4（AM905427）的核苷酸序列设计特异性引物,分别克隆正反向ΔHC-Pro基因片段。先将反向片段ΔHC-Pro（i）插入含内含子的载体pSK-In,获得中间载体pSK-In-ΔHC-Pro（i）。再将In-ΔHC-Pro（i）从pSK上切下,插入表达载体pBI121上,获得重组质柆pBI-In-ΔHC-Pro（i）。最后将正向片段ΔHC-Pro（r）插入pBI-In-ΔHC-Pro（i）,得到含ΔHC-Pro反向重复的植物表达载体pBI-ΔHC-Pro（r）-In-ΔHC-Pro（i）。4.反向重复表达载体以农杆菌介导转化烟草利用三亲交配法将反向重复表达载体pBI-ΔHC-Pro（r）-In-ΔHC-Pro（i）导入农杆菌EHA105菌株中,采用叶盘法分别转化本氏烟和普通烟品种云烟85。