鼠抗人FL单克隆抗体的制备及其生物学功能研究

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目的研制鼠抗人Flt3-ligand(FL)单克隆抗体(mAb)并对其生物学功能进行研究。方法采用高表达膜FL的基因工程细胞株L929/FL细胞免疫BALB/c小鼠,利用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,免疫荧光标记和流式细胞术筛选阳性株,采用快速定性试纸法鉴定单抗亚类、间接免疫荧光法检测单抗对肿瘤细胞株的识别谱,然后研究所获得的抗人FL单克隆抗体及FL蛋白对肿瘤细胞生长的影响。结果得到稳定分泌鼠抗人FL单克隆抗体的杂交瘤细胞三株,命名为5H5、5D1、3E5,快速定性试纸法鉴定5H5、5D1属小鼠IgM亚类及κ型,3E5属小鼠IgG1亚类及κ型;经体内诱生腹水法制备抗体,小鼠腹水形成的阳性率约为80%,腹水的收获量平均为2 ml/只小鼠;经免疫亲和层析法纯化,腹水中抗体蛋白的得率为1.0 mg/ml;用流式细胞术分析细胞膜荧光标记百分率和荧光强度,结果显示,FL能不同程度地在某些肿瘤细胞株上表达。将FL蛋白和3E5加入到U937、675321、THP-1细胞的培养体系中,经细胞计数分析,3E5能够阻断FL蛋白对U937、675321、THP-1细胞生长的促进作用。结论本研究获取三株分泌鼠抗人FL单克隆抗体的杂交瘤细胞,且3E5为一株阻断型单克隆抗体,这为研究FL及Flt3功能奠定了物质基础。
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