【摘 要】
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人胰岛素原C肽(简称C肽)是胰岛素原A、B链之间的连接肽,在加工成胰岛素的过程中,被切割下来的肽段.它通过刺激Na+-K+-ATPase和NO合酶来的途径从而减轻1型糖尿病病人的并发症,
【出 处】
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中国科学院上海生命科学研究院生物工程研究中心 中国科学院上海生命科学研究院
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人胰岛素原C肽(简称C肽)是胰岛素原A、B链之间的连接肽,在加工成胰岛素的过程中,被切割下来的肽段.它通过刺激Na+-K+-ATPase和NO合酶来的途径从而减轻1型糖尿病病人的并发症,如血视网膜,微血管,肾脏和神经病变.C肽为31个氨基酸的短肽,为克服单独表达的困难和低产量,在获得单拷贝基因的基础上,我们对C肽基因进行了三个拷贝的串联,选择带6His+的表达载体pET32a,在大肠杆菌HMSl74(DE3)中获得高表达,经过Ni/NTA亲和纯化得到纯度为70％左右的融合蛋白C肽(fCP3),然后进行羧肽酶B和胰蛋白酶的裂解,最后用HPLC方法从裂解液中分离纯化到了C肽单体.通过氨基酸组成分析和免疫荧光方法进一步对C肽进行了鉴定.另外,我们还对C肽融合蛋白工程菌进行了15L发酵罐的中试实验,也取得了初步成功,共收获湿菌体355g.临床研究证实C肽对1型糖尿瘸病人的肾脏和神经功能具有改善作用,所以该文采用肾脏来源的293和COS-7细胞系和神经来源的U251和SHG细胞系来研究C肽对他们的影响.MTT比色结果显示,C肽能够促进293和U251细胞的生长,且3nmol/L的C肽作用最为有效.而对COS-7和SHG细胞的生长促进效果不明显.
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