一氧化氮处理后长白落叶松转录组测序及LoERF017基因功能研究

来源 :东北林业大学 | 被引量 : 7次 | 上传用户:fever1879
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长白落叶松(Larix olgensis Henry)是我国东北部地区主要造林树种之一,其木材坚实耐腐,抗压强度大,具有较高的工艺价值。本研究利用Illumina技术对一氧化氮处理后的长白落叶松幼苗进行了转录组测序和从头组装,并对得到的转录组数据进行分析。结果表明,一些参与生物和非生物胁迫反应的基因发生了差异表达。选择其中表达量显著提高的LoERF017基因进行克隆,并分析了该基因在不同组织不同胁迫下的转录表达情况,同时将其转化到拟南芥中进行功能验证。具体结果如下:(1)利用Illumina技术测定一氧化氮供体硝普钠处理和未处理的长白落叶松转录组序列信息。通过Illumina Hiseq2000平台测序,总计产出9.09G高质量数据,组装出unigene51176个,平均长度834 nt,N50达到1365 nt,其中40206个Unigene得到注释。测序分析结果表明,硝普钠处理引起大量基因的差异表达,即有2671个基因上调表达,3674个基因下调表达。通过分析差异表达基因的代谢途径发现,参与植物生物和非生物胁迫的基因发生了差异表达,例如ERF、LEA、NAC、WRKY33、PR1等。(2)利用RACE技术,对长白落叶松ERF017基因进行了全长克隆,该基因的开放阅读框长度为624 bp,编码207个氨基酸,含有一个AP2/EREBP结构域,属于AP2/EREBP家族的DREB亚族。通过亚细胞定位实验发现LoERFO17基因定位于细胞核中。(3)对长白落叶松根、茎、叶在ABA、NaC1、PEG6000和硝普钠处理下在不同时间点(0h、3h、6h、12h和24 h)的表达模式进行了分析,发现LoERF017基因在各种胁迫下表达量都有所变化,硝普钠处理下叶中的基因表达量提高最为显著,另外,PEG6000胁迫下根的表达量也提高了近5倍。(4)构建了LoERF017基因的过表达载体,通过花序侵染法成功地获得转LoERF017基因拟南芥株系。通过在干旱和盐胁迫条件下的萌发率及幼苗的抗逆能力分析,发现过表达LoERF017基因能够有效地提高植物的抗旱、耐盐性。通过细胞的受损情况观察(NBT染色、苯胺蓝染色)和各项生理指标(MDA、SOD、POD)的比较研究发现,在干旱胁迫条件下,LoERF017基因的过表达拟南芥的细胞受损情况显著低于野生型,而SOD和POD活性显著高于野生型。这表明过表达LoERF017转基因拟南芥可能直接或间接启动了抗氧化酶系统来提高抗旱性。
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