一种基于适配体的方法快速检测宫颈癌标志物P16INK4A

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目的:对宫颈癌的筛查有助于疾病早期发现、早期诊断、早期治疗。为此我们提出了一种可用于宫颈癌筛查的检测方法,该方法可快速检测宫颈癌标志物P16INK4A。  方法:构建重组质粒p16ink4a-pET28a,在大肠杆菌中表达P16INK4A,利用亲和层析纯化P16INK4A,最后利用western blot验证P16INK4A。以纯化的重组蛋白P16INK4A作靶蛋白,利用SELEX技术筛选其特异性适配体,通过分析亲和力最终选出一条高亲和力、高特异性的适配体。枸橼酸钠还原法制备13nm纳米金颗粒并表征。建立基于纳米金和适配体的分析方法,并对其进行方法学的考察。  结果:重组蛋白P16INK4A在大肠杆菌中成功表达,亲和层析制备了高纯度的重组蛋白并鉴定为正确。筛选出一条Kd值为5.624nM的高亲和力的适配体并验证可以和重组蛋白结合。制备出分散良好、大小均一13nm纳米金。建立了基于纳米金和适配体的分析方法。该方法的检测限是4.52nM,定量限是12.5nM,批次间和批次内变异系数均不超过10%,回收率在96.03%-107.04%之间。  结论:成功筛选出一条抗重组P16INK4A的高亲和力、高特异性的适配体,利用该适配体和纳米金建立了一种可快速检测宫颈癌标志物P16INK4A分析方法,该方法具有较好的准确度和精密度。
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