分枝杆菌的质谱分型及其对利奈唑胺耐药机制的研究

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目的:研究基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI TOFMS)在鉴定临床结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌中的可行性和准确性;检测利奈唑胺对多重耐药结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌的体外活性并研究脓肿分枝杆菌对利奈唑胺的耐药机制。方法:收集临床分离47株菌株,经hsp65和rpoB基因测序确认,使用MALDI TOF MS鉴定分型;比例法检测70株多重耐药结核分枝杆菌和24株非结核分枝杆菌对利奈唑胺的敏感性;检测脓肿分枝杆菌与利奈唑胺耐药相关的23s rRNA、rplC、rplD、rplV以及whiB基因突变,以及PCR检测质粒介导的耐药基因cfr;观察外排泵抑制剂利血平存在下利奈唑胺对脓肿分枝杆菌最低抑菌浓度(MIC)的差异。结果:1.47株分枝杆菌包括8株结核分枝杆菌复合群,2株结核分枝杆菌,30株胞内分枝杆菌,2株堪萨斯分枝杆菌,1株脓肿分枝杆菌,4株M. marseillense。 MALDI TOF MS准确鉴定了除4株Mmarseillense外的其余菌株。本实验成功建立了M. marseillense的飞行时间质谱数据库。2.利奈唑胺对70株多重耐药结核分枝杆菌有很好的抗菌活性。利奈唑胺MIC均=1μg/ml,MIC50为0.5μg/ml,MIC90为1μg/ml。利奈唑胺对M. marseillense的MIC为4μg/ml,利奈唑胺对胞内分枝杆菌MIC为8-16μg/ml,对脓肿分枝杆菌MIC为64μg/ml。3.利奈唑胺耐药的脓肿分枝杆菌未检测到23s rRNA、rplC、rplD、 rplV以及whiB基因突变,未发现质粒介导的cfr基因。在利血平存在下,脓肿分枝杆菌的MIC降低至8μg/ml和16μg/ml,提示有外排泵机制存在。结论:1.MALDI TOF MS可快速准确鉴定临床分离分枝杆菌,在临床常规鉴定方面有着较好的应用前景。2.首次发现并对鸟-胞内分枝杆菌复合群亚种M. marseillense并对其建立了质谱数据库。3.利奈唑胺对多重耐药结核分枝杆菌具有良好的体外活性;对非结核分枝杆菌的活性存在种间差异。4.首次发现脓肿分枝杆菌对利奈唑胺的耐药机制与外排泵表达有关。
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