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目的:探讨槐定碱联合顺铂对宫颈腺癌Hela细胞增殖的影响,以期对宫颈腺癌的临床治疗提供新的思路和实验室理论依据。方法:体外培养宫颈腺癌细胞系Hela细胞:采用细胞增殖与毒性试验法即MTT法检测不同浓度的槐定碱及其联合顺铂对Hela细胞的增殖抑制率的影响,并计算半数抑制率IC50,且用金正均Q值法判断两药的联合效应,倒置相差显微镜下观察Hela细胞的形态学改变:Hoechst33342染色法观察不同浓度的槐定碱联合顺铂作用24h后Hela细胞的形态学改变及凋亡情况;应用流式细胞术测定不同浓度的槐定碱联合顺铂作用24h后对Hela细胞周期分布及凋亡率的影响;应用Western Blot法检测不同浓度的槐定碱联合顺铂作用24h后Hela细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、P53、Caspase-3的表达情况。结果:(1)MTT结果表明:槐定碱能够明显抑制宫颈腺癌Hela细胞的体外增殖(P<0.05),其作用呈明显的剂量-时间依赖性,计算24h、48h和72h的半数抑制率IC50分别为5.5mg/ml、4.2mg/ml及2.1mg/ml,应用金正均Q值法判断两药的联合效应为:槐定碱联合顺铂作用于Hela细胞24h后,槐定碱浓度<1.0mg/ml,两药为拮抗作用(Q>0.85);槐定碱浓度≥1.0mg/ml两药为协同作用(Q>0.85);槐定碱联合顺铂作用于Hela细胞48h及72h后,不同浓度的槐定碱联合顺铂组均表现出协同作用(Q>0.85),各组两两比较差异有统计学意义(P<0.05);槐定碱及其联合顺铂处理24h后,Hela细胞的形态发生显著变化,且随着槐定碱浓度的增加形态学变化愈加明显。(2)Hoechst33342染色证实槐定碱联合顺铂可以诱导宫颈腺癌Hela细胞凋亡,并可见典型的凋亡小体;(3)流式细胞术检测细胞周期结果表明:槐定碱联合顺铂可影响宫颈腺癌Hela细胞周期分布,随着槐定碱浓度的增加,G0/G1期细胞的百分比逐渐降低而S期细胞的百分比逐渐增高,呈现S期阻滞,差异具有统计学意义(P<0.05);与顺铂组相比较,联合用药组①的G0/G1期细胞的百分比高于顺铂组,S期细胞的百分比低于顺铂组,差异有统计学意义(P<0.05);联合用药组②③④的G0/G1期细胞的百分比低于顺铂组,S期细胞的百分比高于顺铂组,与顺铂组及各组间比较均具有统计学差异(P<0.05)。(4)流式细胞术检测细胞凋亡率结果表明:槐定碱联合顺铂能够诱导宫颈腺癌Hela细胞发生凋亡,与阴性对照组相比,顺铂组及联合用药组的凋亡率升高,差异有统计学意义(P<0.05);与顺铂组相比较,联合用药组①组的凋亡率低于顺铂组,差异有统计学意义(P<0.05);联合用药组②③④的凋亡率高于顺铂组,协同顺铂促凋亡效应,与顺铂组及各组间比较均具有统计学差异(P<0.05)。(5) Western Blot结果证实:槐定碱联合顺铂作用于宫颈腺癌Hela细胞24h后,与阴性对照组相比较,顺铂组及槐定碱联合顺铂组均可使Bcl-2蛋白表达下调,P53蛋白、Bax蛋白及Caspase-3蛋白表达上调,差异有统计学意义(P<0.05);与顺铂组相比较,联合用药组①组的Bcl-2蛋白表达率高于顺铂组,Bax蛋白、P53蛋白及Caspase-3蛋白表达率低于顺铂组,差异有统计学意义(P<0.05),联合用药组②③④随着槐定碱浓度的增加,Bcl-2蛋白表达逐渐降低,Bax、P53及Caspase-3蛋白表达逐渐增加,与顺铂组及各组间相比较均具有统计学意义(P<0.05)。结论:(1)槐定碱可以时间-剂量依赖性的抑制宫颈腺癌Hela细胞的增殖。槐定碱与顺铂联合应用具有协同抗肿瘤作用。(2)槐定碱联合顺铂抑制宫颈腺癌Hela细胞的增殖作用的机制可能与诱导Hela细胞凋亡,S期阻滞,下调Bcl-2蛋白的表达,上调Bax、P53、Caspase-3蛋白的表达及下调Bcl-2/Bax的比值有关,因此槐定碱联合顺铂引起Hela细胞的凋亡可能是通过P53依赖的凋亡途径完成的。