论文部分内容阅读
目的:1.探讨大鼠双耳增生性瘢痕模型建立的可行性。2.以体外培养的大鼠基质血管成分、脂肪干细胞及大鼠增生性瘢痕成纤维细胞为研究对象,建立Transwell共培养体系。研究基质血管成分、脂肪干细胞对大鼠增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响。3.通过Q-PCR技术探讨二者通过何种信号通路影响增生性瘢痕成纤维细胞I型胶原蛋白的表达和增殖。方法:动物实验:取30只SPF级雄性SD大鼠进行双耳增生性瘢痕建模。建模成功后随机分为两组,取大鼠双耳瘢痕块,使用螺旋测微器测量增生性瘢痕块的厚度,按照温哥华瘢痕测量表[2]对所取鼠耳瘢痕的增生情况进行评估。通过HE染色观察正常鼠耳组织及瘢痕增生鼠耳组织细胞的形态,并测量真皮厚度。在已建立成功的大鼠双耳增生性瘢痕块中提取成纤维细胞原代,并从大鼠双侧腹股沟脂肪组织中提取大鼠基质血管成分和脂肪干细胞,在倒置显微镜下观察大鼠增生性瘢痕成纤维细胞、基质血管成分和脂肪干细胞形态。细胞实验:以体外培养的大鼠基质血管成分、脂肪干细胞及大鼠增生性瘢痕成纤维细胞为研究对象,建立三者Transwell共培养体系,培养24h后取下室大鼠增生性瘢痕成纤维细胞进行结晶紫染色,通过Image J灰度分析计算细胞面积绘制Graphpad prism统计图,观察大鼠增生性瘢痕成纤维细胞增殖面积。通过Q-PCR法检测增生性瘢痕成纤维细胞中MAPK信号通路、I型胶原蛋白的表达。结果:1.肉眼观察下发现形成增生性瘢痕块的鼠耳与正常的鼠耳有明显的不同。应用温哥华瘢痕量表[2]显示增生性瘢痕的组织在色泽、厚度、柔韧度、血管分布等方面都和人的增生性瘢痕相似。HE染色后发现大鼠鼠耳真皮层有较强的增生性,同时表皮下的结缔组织也在不断地生长,病理特点与人类增生性瘢痕的病理改变相近。测量大鼠耳正常皮肤真皮厚度和大鼠增生性瘢痕皮肤真皮厚度,两者对比差异有统计学意义（P<0.01）。2.根据结晶紫染色后的transwell细胞克隆图,通过时间对照,可以观察到增生性瘢痕成纤维细胞的增殖能力受到抑制,且基质血管成分较脂肪干细胞对增生性瘢痕成纤维细胞的抑制能力更佳。3.Q-PCR检测显示基质血管成分和脂肪干细胞均能使增生性瘢痕成纤维细胞的I型胶原蛋白表达下调,且基质血管成分中的增生性瘢痕成纤维细胞的I型胶原蛋白表达下调更明显。MAPK信号通路中,MAPK3通路下调,MAPK1表达下调组结果相反,基质血管成分和脂肪干细胞可能通过抑制MAPK3通路去抑制I型胶原蛋白的表达,从而抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖。结论:1.成功制备了稳定的大鼠鼠耳增生性瘢痕模型。2.基质血管成分和脂肪干细胞可能通过抑制增生性瘢痕成纤维细胞MAPK3信号通路,抑制I型胶原蛋白的表达及增殖,且前者抑制能力更强。