酶的级联反应往往需要多种酶以不同比例协同作用，但是目前多酶共固定的研究较少，控制多酶固定顺序及比例的研究更为少见。本文旨在开发一种体外比例可控且定序固定多酶的方法。　　本文选择核壳式纳米磁球作为固定载体，一种是Fe3O4/PVIM-Ni2+，其表面的镍离子可以和His标签特异性结合;一种是Fe3O4-Au，其表面的金粒子可以和硫醇共价结合。我们设计了两类支架蛋白:Ⅰ类支架蛋白含有His标签、硫醇基和olpB黏合域（1～7个不等），一方面可与纳米磁性微球结合，另一方面根据黏合域和相应锚定域(docCipA)之间的特异性结合作用可固定融合了锚定域的蛋白（本文选用绿色荧光蛋白GFP和红色荧光蛋白DsRed为模型来进行研究）。Ⅰ类支架蛋白的单酶多层固定表明:荧光蛋白的负载量随着支架蛋白上结合位点的增多先增加后减少，当结合位点为四个时达到最大值(0.937μmol/g)。　　Ⅱ类支架蛋白具有His标签和两种黏合域A和C，分别和锚定域docA、docC结合，设计不同数量和位置的A和C得到多个支架蛋白，对两种融合了锚定域的荧光蛋白共固定后发现，固定不同荧光蛋白的摩尔计量比和相应黏合域的数量比基本一致。支架蛋白上黏合域的个数越多，蛋白越难表达，综合考虑本文选用具有三个结合位点的支架蛋白ACA和CAC进行定序可控固定双荧光蛋白的研究，按不同比例混合以上两种支架蛋白，定序固定的双荧光蛋白摩尔计量比从1∶3渐变到7∶4，最大负载量可达0.831μmol/g。