基于适配体高通量快速检测农药残留的悬浮芯片技术及试剂盒应用

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农业的快速发展导致农药的种类增加,使用也越来越广泛。各种各样的农药残留问题也越发的严重。近些年来对农药残留的检测手段也得到了充分的发展。其中基于核酸适配体进行农药残留的检测技术在日常生活中发挥着重要作用。相比于传统检测方法使用的抗体,适配体合成和修饰较容易,可利用适配体检测的目标物种类较多。近些年来的一些研究方法将适配体与荧光检测,电化学检测,拉曼光谱等方法进行结合。这些方法可以更加准确,灵敏地检测出农药残留量。其中有部分新方法还实现了高通量检测。但这些方法的检测时间较长,没有达到日常检测的高通量需求。因此有必要研发一种高通量,耗时低的方法。本研究首先对悬浮芯片技术进行熟知掌握,并设计出相应的实验原理。确定五种农药残留的适配体,设计并验证了新的互补链片段。利用不同编号的微球进行定性分析,用可与互补链上的生物素偶联的SA-PE进行定量分析。构建了一种高通量,高灵敏性,快速检测雌二醇,双酚A,多氯联苯,阿特拉津,丙溴磷的检测平台。该平台所采用的适配体与农药残留小分子结合能力强,新设计的互补链片段较以往常用的可提高方法的灵敏度,同时缩短了检测时间,在40 min左右完成检测。在该平台的基础上设计并验证了检测农药残留的高通量快速检测试剂盒。该试剂盒在4℃的条件下可保存20天左右,且在7天内使用最佳。最终结果表明该方法灵敏度较其它方法有所提高且对阿特拉津,丙溴磷,双酚A,雌二醇,多氯联苯的最低检出限分别为9.4653,20.7514,23.8094,8.9712,6.2677 pg/m L。海河样品中加标的稀释农药残留的回收率在87.5~111.02%之间,相对标准偏差(RSD)低于28.44%。本方法与试剂盒为高通量检测农药残留提供了至少几十种搭配,在高通量快速检测农药残留方面有广泛的前景及发展。
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