CD19分子是B淋巴细胞表面的Ⅰ型跨膜糖蛋白，也是B淋巴细胞表面重要标志之一。CD19是CD19/CD21/CD81信号复合体中一个成分，信号复合体可调节BCR刺激活化的阈值，其中CD21(CR2)结合BCR上的补体C3片段，使CD19与BCR交联，促进B细胞激活，这种作用对于B细胞初次应答尤为重要<[1～3]>。CD19胞膜外区参与了与CD21和CD81的相互作用，CD19的跨膜区也参加了与CD21和CD81的相互作用。CD19胞浆区可与PI-3K，Vav以及Src家族中Lyn，Fyn激酶相结合<[4～7]>。 首先根据GenBank登录的小鼠CD19基因序列<[8]>设计一对引物，通过反转录-聚合酶链式反应(Reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR)技术，从小鼠脾脏组织总RNA中扩增出一条特异性基因片段，经单酶切鉴定，与GenBank中登录的小鼠CD19基因序列含有相同的单酶切位点。PCR产物分离纯化后连接到pGEX-4T-1载体，经菌液PCR筛选出阳性重组克隆后进行序列测定。结果表明本实验成功的克隆到CD19基因的胞膜外区片段，由918个核苷酸组成，编码306个氨基酸。所克隆的小鼠MECD19基因与GenBank中登录的小鼠CD19基因<[14]>相比较，有6个核苷酸的差异，同源性为99.7％。 其次，将原核表达重组质粒pGEX-4T-1-MECD19转化到大肠杆菌BL21，经37℃和1.0mmol/L IPTG的诱导，SDS-PAGE凝胶电泳表明所克隆的基因片段在大肠杆菌中得到融合表达，表达出谷胱甘肽-S-转移酶(GST)与MECD19的融合蛋白GST-MECD19，且表达的产物主要以包涵体的形式存在。所获得的融合蛋白分子量分别约为59 KD，与预期结果相符。 最后，通过优化原核表达条件，确定了原核表达重组质粒pGEX-4T-1-MECD19的最佳诱导时间和诱导剂浓度后，对含有pGEX-4T-1-MECD19质粒的BL21菌进行了大量诱导表达，实验中使用反复冻融和超声方法来裂解诱导表达菌，获得了较高浓度的GST-MECD19包涵体蛋白，用十二烷基肌氨酸钠加超声波的方法使包涵体充分溶解，提取了大量的可溶性GST-MECD19原核融合表达蛋白。 综上所述，本研究成功地克隆了小鼠CD19基因的胞外区片段，并进行了原核表达，获得了大量的GST-MECD19原核融合表达蛋白，这些都为进一步研究小鼠CD19分子免疫学功能及其应用提供了试验材料。 表达组蛋白是真核生物染色体(质)中含量最高的结构蛋白，其总量与染色体DNA大致相等。组蛋白属于碱性蛋白质，等电点一般在pH10.0以上，能与带有负电荷的DNA分子紧密结合。按组成中精/赖氨酸的比例，组蛋白可被分为五种：H1、H2A、H2B、H3、H4。H1组蛋白由220个氨基酸组成，分子量较大，进化中不如其它组蛋白那么保守，哺乳类细胞的组蛋白H1约有8种密切相关的，氨基酸系列上稍有不同的亚型，H1组蛋白在构成核小体时起连接作用，可赋予染色质以极性，与核小体包装成更高一级结构的过程相关<[1～4]>。 首先根据GenBank登录的人组蛋白Histl Hle基因序列<[5]>设计一对引物，先通过提取人基因组DNA，再利用PCR技术，从人基因组DNA中扩增出一条特异性基因片段。PCR产物分离纯化后连接到pET-32a载体，经菌液PCR筛选出阳性重组克隆后进行序列测定。结果表明本实验成功的克隆到人组蛋白Hle基因的C末端区域，由435个核苷酸组成，编码145个氨基酸。所克隆的人组蛋白Hle C基因与GenBank中登录的人组蛋白Hle基因相比较，同源性为100％。 其次，将原核表达重组质粒pET-32a-Hle C转化到大肠杆菌BL21，经37℃和1.0mmol/L IPTG的诱导，SDS-PAGE凝胶电泳表明所克隆的基因片段在大肠杆菌中得到融合表达，表达出含有His Tag与人组蛋白Hle基因的融合蛋白His-Hle C，且表达产物主要以包涵体的形式存在。所获得的融合蛋白His-Hle C分子量约为36 KD，与预期结果相符。 最后，通过优化原核表达条件，确定了原核表达重组质粒pET-32a-Hle C的最佳诱导时间和诱导剂浓度后，对含有pET-32a-Hle C质粒的BL21菌进行了大量诱导表达，实验中使用反复冻融和超声方法来裂解诱导表达菌，获得了较高浓度的His-HleC包涵体蛋白，用十二烷基肌氨酸钠加超声波的方法使包涵体充分溶解，提取了大量的可溶性His-Hle C原核融合表达蛋白。 综上所述，本研究成功地克隆了人组蛋白Hle基因的C末端区域，并进行了原核表达，获得了大量的His-Hle C原核融合表达蛋白，这些都为进一步研究人组蛋白Hle分子免疫学功能及其应用提供了试验材料。