猪繁殖与呼吸综合征是一种能引起母猪繁殖障碍、新生仔猪呼吸道症状及高死亡率的传染病。该病于1987年首先暴发于美国,随后迅速向世界各地蔓延:我国郭宝清等于1996年从疑似本病的猪群中分离到PRRSV,从而确认了PRRS在我国的存在。由于基因的变异,近两年我国大部分地区暴发了以高传染性、高死亡率为特征的高致病性蓝耳病,给我国的养猪业造成了巨大的经济损失。目前PRRS的确诊依赖于病毒的分离鉴定、血清学诊断方法以及分子生物学诊断方法等。血清学诊断方法包括免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)、间接荧光抗体试验(IFA)、乳胶凝集试验(LAT)、血清中和试验(SN)以及酶联免疫吸附实验(ELISA)等;分子生物学诊断方法包括聚合酶链式反应(PCR)技术、核酸探针原位杂交技术(ISH)等。这些诊断方法由于检测时间较长及检测所需仪器设备较昂贵,多数不适合于临床快速诊断。近几年来兴起的免疫胶体金诊断试纸法很好的弥补了这些不足,但要想成功的开发出胶体金诊断试纸,首先必须制备高亲和力、高特异性的单克隆抗体。本实验的目的就是制备高亲和力、高特异性的抗PRRSV N蛋白的单克隆抗体,为下一步开发PRRS胶体金诊断试纸建立基础。本试验利用南京农业大学已构建的含有PRRSV N蛋白基因的重组表达载体阳性菌,在37℃条件下,用终浓度1mM的IPTG诱导表达4h。经SDS-PAGE分析,表明N基因在大肠杆菌中得到了高效表达。经镍柱亲和层析纯化,获得了纯度较高、免疫学活性较好的N蛋白。以此蛋白作为抗原对BalB/C小鼠进行长程免疫,取抗体效价较高的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞用PEG-1500进行融合,融合率为60.6%。建立间接ELISA方法,用于检测杂交瘤细胞上清中的单克隆抗体,初检阳性率为16.1%。经多次亚克隆及反复筛选,获得了2株能稳定分泌抗PRRSV单抗的杂交瘤细胞株,命名为4D3和15F6。将得到的单抗株进行初步鉴定,两单抗株特异性针对PRRSV共同的抗原表位。4D3和5F6杂交瘤细胞株经过反复冻存、复苏及多次传代,均能分泌较高效价的抗体,其抗体效价保持在1:1000以上;将杂交瘤细胞注入小鼠腹腔内诱生腹水,7天后将收集的腹水以辛酸-硫酸铵法提纯,间接ELISA检测其效价达1:102400以上。因此,上述杂交瘤细胞将会在PRRS的诊断中发挥重要的作用。