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目的:探讨在细胞中外源性添加S100A8/S100A9的培养条件下,S100A8、S100A9是否通过p38MAPK细胞通路调控EMT,从而促进鼻咽癌细胞侵袭迁移。方法:1、分别在CNE1、CNE2和6-10B三种鼻咽癌细胞系中添加0、0.25、0.5、1、3、5μg/ml S100A8/S100A9蛋白,培养24h后CCK8法检测不同浓度的蛋白对各个细胞系增殖能力的影响;添加1μg/ml S100A8/S100A9蛋白通过平板克隆实验检测CNE1和CNE2细胞克隆形成能力的变化。2、培养基含1μg/ml S100A8/S100A9的实验组与无添加的对照组,通过划痕实验和黏附实验初步检测CNE2细胞侵袭迁移情况,并利用Transwell实验比较三株鼻咽癌细胞实验组和对照组的侵袭迁移能力。3、培养基添加1μg/ml S100A8/S100A9蛋白,培养CNE1、CNE2和6-10B细胞,分别在0、0.5、1、3、6、12h六个时间段收取细胞总蛋白,Western blot检测p38MAPK、JNK MAPK、ERK MAPK、NF-ΚB和Wnt/β-catenin通路各节点蛋白的累积变化;同时检测上皮间质转化(EMT)关键标志物E-cadherin和N-cadherin蛋白的表达。4、下室添加1μg/ml S100A8/S100A9蛋白作为趋化条件,Transwell实验比较实验组(p38 MAPK通路抑制剂SB230580预处理鼻咽癌细胞)和对照组(SB230580稀释剂DMSO预处理的鼻咽癌细胞)的侵袭迁移能力影响;并运用Western blot和q RT-PCR检测实验组和对照组EMT关键蛋白E-cadherin和N-cadherin蛋白表达变化;q RT-PCR检测侵袭迁移关键标志物基质金属蛋白酶(MMPs)基因的表达变化。结果:1、在0.25、0.5、1、3、5μg/ml的S100A8/S100A9蛋白作用下,24h后CCK8法检测CNE1、CNE2和6-10B细胞增殖情况,三株细胞均表现出增长趋势;并且平板克隆实验显示,添加1μg/ml S100A8/S100A9蛋白的实验组克隆形成能力高于未添加的对照组(p<0.05)。2、培养基添加1μg/ml S100A8/S100A9蛋白的实验组在划痕后6h、24h、36h、48h,CNE2细胞迁移面积大于对照组(p<0.05);同样,在包被基质胶的培养板中培养CNE2细胞1h,黏附在基质上的细胞,实验组多于对照组(p<0.05);Transwell迁移与侵袭实验直接显示1μg/ml S100A8/S100A9蛋白促进CNE1、CNE2和6-10B细胞侵袭迁移(p<0.05).3、Western blot检测1μg/ml S100A8/S100A9蛋白对p38MAPK、JNK MAPK、ERK MAPK、NF-ΚB和Wnt/β-catenin通路的影响,结果显示,p38MAPK和Wnt/β-catenin通路有激活现象,p-p38蛋白和β-catenin蛋白在细胞内累积增加。CNE1细胞p-p38蛋白累积在0.5h开始上调,到6h达到峰值(p<0.01);β-catenin蛋白在1h上调最为明显。CNE2和6-10B细胞p-p38蛋白都是在1h上调最为显著(p<0.05)。Western blot检测EMT标志蛋白表达,三株细胞均出现E-cadherin蛋白表达下调(p<0.05);而N-cadherin蛋白均出现上调现象(p<0.05)。4、Transwell迁移和侵袭实验显示,SB230580抑制p38 MAPK通路后,穿过聚碳酸酯滤膜的细胞数减少(p<0.05),提示通路抑制后S100A8/S100A9蛋白诱导三株鼻咽癌细胞系侵袭迁移能力减弱;Western blot检测EMT标志蛋白,SB230580预处理的实验组与对照组相比,E-cadherin表达上调,N-cadherin表达下调(p<0.05);q RT-PCR检测MMPs基因的表达变化,三株鼻咽癌细胞存在不同,CNE1细胞MMP1、MMP2、MMP3、MMP7和MMP9实验组与对照组相比表达下调,尤其是MMP7下调尤为明显;CNE2细胞SB230580预处理组仅有MMP1、MMP2和MMP9基因表达下调,差异具有统计学意义(均p<0.05)。6-10B细胞有MMP1、MMP2、MMP7和MMP9基因表达下调,差异具有统计学意义(均p<0.05)结论:1μg/ml S100A8/S100A9蛋白可促进鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭并发生上皮间质转化(EMT)。S100A8/S100A9蛋白发挥促进鼻咽癌细胞侵袭迁移的作用机制可能是通过p38 MAPK通路诱导鼻咽癌细胞发生EMT。