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目的:
采用不同浓度的PM2.5作用于培养的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC),测定PM2.5染毒后VSMC中ET-1、NO、iNOS、增殖细胞核抗原(PCNA)及血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)水平变化,并观察各组细胞形态改变及增殖情况,探讨PM2.5对VSMC增值的影响。
方法:
1.大鼠VSMC体外培养,取第4-8代对数生长期的VSMC用于实验研究。
2.应用PM2.5空气采样仪,采集湛江市区PM2.5,超声震荡洗脱颗粒物后冷冻真空干燥成干粉,-20℃保存备用。
3.配制终浓度为10,20,50,100,200μg/mL的PM2.5溶液,将VSMC分为对照组、10、20、50、100、200μg/mL,染毒组,实验组VSMC染毒24小时。
4.MTT法检测PM2.5对体外培养的VSMC增殖影响,倒置相差显微镜下观察各组VSMC形态变化。
5.免疫组化法检测不同浓度PM2.5对VSMC中PCNA、VCAM-1表达的影响。
6.硝酸还原酶法检测不同浓度PM2.5染毒后VSMC中NO、iNOS水平变化。
7.放射免疫法(RIA)检测不同浓度PM2.5染毒后VSMC中ET-1水平变化。
结论:
PM2.5促进体外培养的VSMC增殖,在10-200μg/ml浓度范围内具有剂量依赖性。