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背景及目的: 内窥镜容易对很多非隆起型癌灶、原位癌、微小肿瘤漏诊，因为其外表及颜色往往与正常组织无异，而分子成像技术有助早期诊断弥补这一缺陷，肿瘤分子成像是一种反映肿瘤组织的病理生理及代谢变化的显像。PpIX介导的肿瘤分子成像技术的关键点在于如何特异地增加肿瘤组织中的内源性PpIX，以致癌组织与正常组织在PpIX的含量上产生差异。目前国内外研究组大多通过应用外源性ALA而达到增加肿瘤组织的PpIX的合成量。然而要在内窥镜下用肉眼直接观察到肿瘤病灶，必须使用远超生理量的大剂量ALA，才能产生足够的PpIX在肿瘤组织积聚。当大剂量的外源性ALA进入体内后，容易产生全身毒副作用。成为ALA-PpIX分子成像技术在临床上应用的技术难关。肿瘤细胞表面高表达转铁蛋白受体，转铁蛋白通过和受体特异性结合从而体现出靶点作用，转铁蛋白纳米载体从中作为一个传递载体通过靶向运输siRNA联合应用小剂量的ALA达到PpIX在肿瘤积聚，使荧光增强。用siRNA敲减了FECH，阻挡了PpIX的去路，联用了小剂量的ALA增加了PpIX的来源，使得大量PpIX在肿瘤组织内积聚，用肉眼即可辨别出肿瘤部位。本实验通过裸鼠移植瘤为模型，开展活体动物体表肿瘤荧光成像从而达到检测早期肿瘤的目的。 方法: 1、筛选TfR高表达细胞株。选取三株妇科肿瘤细胞，用荧光定量PCR和WesternBlot法分别于不同时间点(12h，24，36)，给予不同浓度的Deferoxamine(0.05mM、0.1mM、0.15mM)检测肿瘤细胞基因水平和蛋白水平TfR的表达情况。 2、用TransMessenger kit(Qiagen)转染高表达TfR细胞株以沉默FECH在细胞内的表达。检测TfR高表达细胞株内的PpIX荧光。用高表达TfR细胞株进行以下分组实验:Control组，ALA组(0.025mM、0.05mM、0.1mM)，mix-siRNA-FECH组(0.16uM),mix-siRNA-FECH组(0.16uM)+ALA(0.025mM)组，mix-siRNA-FECH组(0.16uM)+ALA(0.05mM),mix-siRNA-FECH组(0.16uM)+ALA(0.1mM)检测各组细胞内的PpIX荧光。 3、优选ALA的最小剂量:接种高表达TfR细胞株，建立裸鼠腹膜移植瘤模型，待成模后，采取裸鼠瘤内注射的方法，给予不同浓度的ALA(1mg/kg，2.5mg/kg，5mg/kg)，小动物活体成像仪检测裸鼠肿瘤组织内PpIX荧光。 4、检测动物模型肿瘤组织内的PpIX荧光。检测动物模型肿瘤组织内的PpIX荧光。对成模的裸鼠，分别进行以下分组:Tf-Liposome组，invivofection组，ALA组，si-FECH组，TfR-liposome-ALA+siRNA-FECH组，TfR-liposome-ALA+invivofection-siRNA-FECH组检测各组动物肿瘤组织内荧光。 结果： 1、Hela229、mcf-7、skov3三株不同的细胞株，分别于不同时间点(12h、24h、36h)给予不同浓度的DFO，筛选出了一个高表达TFR细胞株:SKOV3。 2、检测TfR高表达细胞株内的PpIX荧光显示:Control组没有荧光，ALA组和siRNA-FECH组有微弱的荧光，但荧光强弱没有太大差异，ALA+siRNA-FECH组荧光最强。 3、动物肿瘤模型:局部注射能出现PpIX荧光所用的最小ALA剂量是5mg/kg。 4、裸鼠肿瘤模型中检测PpIX荧光:Tf-Liposome组，invivofection组，ALA组，没有荧光。si-FECH组，TfR-liposome-ALA+siRNA-FECH组有轻微荧光或者是背景光，TfR-liposome-ALA+invivofection-siRNA-FECH组Tf-Liposome组具有特异性荧光。 结论： 基于PpIX介导的分子肿瘤成像技术以及应用外源性ALA而达到增加肿瘤组织的PpIX的合成量，我们用siRNA敲减了亚铁鳌合酶并联合小剂量的ALA，使肿瘤细胞内的PpIX积聚大量增加，PpIX荧光比单用ALA和siRNA显著增强，对于应用转铁蛋白脂质体靶向运输ALA我们进行实验性研究，敲减亚铁鳌合酶联合转铁蛋白脂质体运输小剂量ALA会出现更强的荧光。