目的：研究自然杀伤细胞(NK)对原发性肝癌Heps移植瘤小鼠的增殖抑制作用和机理探讨。　　 方法：诱导扩增昆明小鼠脾细胞来源的NK细胞，体外培养诱导NK细胞。随机取60只8-12周龄雄性昆明小鼠，接种Heps肝癌细胞于其背侧皮下，建立Heps肝癌移植瘤模型。将模型鼠随机分为4组（每组15只）：①生理盐水(NS)对照组，此组小鼠每只注射NS对照组0.1ml，隔日注射，共3次；②NK细胞治疗组1,此组小鼠每只注射3×105/ml的NK细胞0.1ml(即每只小鼠注射NK细胞3X104个)，隔日注射，共3次；③NK细胞治疗2，此组小鼠每只注射3×106/ml的NK细胞0.1ml(即每只小鼠注射NK细胞3×105个)，隔日注射，共3次；④NK细胞治疗组3，此组小鼠每只注射3×107/ml的NK细胞0.1ml(即每只小鼠注射NK细胞3×106个)，隔日注射，共3次。其中，每组各有10只单独用于观察生存期。(1)自注射日起，隔日测量各组小鼠肿瘤长、短径，计算注射后肿瘤体积。(2)记录注射当天开始至小鼠死亡的时间，计算各组小鼠平均生存时间。(3)于注射后第15d,各组分别处死5只小鼠。取肿瘤组织，石蜡包埋并切片，苏木素-伊红(hematoxylin-esosin,HE)染色后光学显微镜观察。(4)于第15d取小鼠脾脏制成脾细胞悬液，用流式细胞术(Flow CytoMeter,FCM)检测NK细胞比例。(5)于第15d取小鼠脾脏制成脾细胞悬液，以小鼠Heps肝癌细胞为靶细胞，乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase,LDH)释放法检测小鼠脾细胞细胞毒活性。(6)取各组小鼠肿瘤组织切片，分别应用Bcl-2抗体、Bax抗体和血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)抗体，行免疫组织化学染色。计数局部肿瘤组织中Bcl-2阳性、Bax阳性细胞数量，并应用图像分析软件对肿瘤细胞VEGF表达强度进行半定量分析。　　 结果：　　 1．成功诱导扩增小鼠脾细胞来源NK细胞。　　 2．小鼠Heps肝癌腹水瘤细胞成功制备小鼠Heps肝癌移植瘤模型，成瘤率100％。　　 3．小鼠Heps肝癌腹水瘤细胞接种于到昆明小鼠背侧皮下，并同时给各组小鼠回输不同浓度的NK细胞以及生理盐水，隔日测量各组小鼠肿瘤的的大小，第20d,治疗1组小鼠肿瘤的体积(1757 mm3)较对照组(5012mm3)明显减小(P＜0.01)。　　 4．回输后60d时，治疗1组最后一只小鼠死亡，而其余各组小鼠均早已死亡，治疗1组小鼠的生存期（平均生存期41天）较对照组（平均生存期20d）、治疗3组（平均生存期18d）显著延长(P＜0.01），较治疗2组（平均生存期21d）也明显延长(P＜0.05）。　　 5．各组小鼠肿瘤HE染色治疗1组、2组、3组小鼠肿瘤细胞形态消失，坏死明显，组织中炎性细胞浸润明显，血管较NS对照组少。　　 6．各组小鼠脾细胞中NK细胞的含量第15d脾细胞悬液FACS检测NK细胞比例，随着注射NK细胞浓度的升高，脾细胞中NK细胞的含量逐渐增高，各治疗组与对照组均有显著差别（P＜0.01），但是各治疗组之间无明显差别。　　 7．各组小鼠脾细胞的细胞毒活性荷瘤小鼠脾中NK细胞杀伤活性随浓度增高而增强。效靶比为10:1及20:1时，各治疗组NK细胞杀伤活性明显高于NS对照组(P＜0.01），而各治疗组间没有明显差异。　　 8．各组小鼠肿瘤Bcl-2-IHC染色：回输后15d，治疗1组、2组Bcl-2蛋白表达明显低于对照组及治疗3组(P＜0.05）。　　 9．各组小鼠肿瘤Bax-IHC染色：回输后15d，治疗1组Bax蛋白表达明显高于对照组及治疗2组、3组(P＜0.05）。　　 10．各组小鼠肿瘤VEGF-IHC染色：回输后15d，治疗1组VEGF表达明显低于对照组及治疗2组、3组(P＜0.05)。　　 11．细胞免疫治疗的副反应回输后11d，治疗3组小鼠死亡3只，治疗2组死亡2只，治疗1组小鼠活动良好，未见特殊不良反应。　　 结论：　　 1．成功制备小鼠脾细胞来源NK细胞。　　 2．大剂量NK细胞早期可以有效地抑制肿瘤的生长。　　 3．NK细胞治疗可以明显提高Heps肝癌移置瘤小鼠的生存期，但是有剂量依赖性，治疗1小鼠的生存期明显延长。　　 4. NK细胞可以下调肿瘤组织内Bcl-2及VEGF的表达，上调Bax的表达。