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目的：通过凋亡-自噬-坏死途径探讨缺氧缺血对新生大鼠海马神经元的损伤,以及外源性E64D对脑损伤可能的保护作用。方法：7日龄新生大鼠分三组：假手术组(A组)：仅分离出左侧颈总动脉,不予结扎,不予低氧处理,与C组同时腹腔注射同等体积的1%DMSO溶液。HIBD模型组(B组)：予以结扎左侧颈总动脉和低氧处理,与C组同时腹腔注射同等体积的1%DMSO。E64D治疗组(C组)：HIBD建模后1小时每只SD大鼠给予腹腔注射E64D,剂量10ug/0.1ml。1.应用免疫印迹法(Western Blot, WB)检测新生大鼠海马中Actived caspase-3、Beclin-1、Spectrin αⅡ (C-3)降解产物三种蛋白分子在0h、2h、6h、12h、24h、48h的表达变化。2.在48h取大脑组织,利用干湿比重法检测大脑的含水量。3.光镜下观察各组大鼠左侧脑组织HE染色的病理变化。结果：1. HIBD模型组中Actived caspase-3蛋白在建模后12h开始明显表达,至24h达到高峰,随后逐渐降低。12h、24h、48h蛋白水平较假手术组表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。E64D治疗组中蛋白水平下降仅在24h的时候与模型组差异有统计学意义(P<0.05)。2.HIBD模型组中Beclin-1蛋白在建模后6h开始明显表达,至12h达到高峰,随后逐渐降低。各时间点蛋白表达水平较假手术组升高,差异有统计学意义(P<0.05)。E64D治疗组6h、12h、24h、48h的蛋白表达水平较模型组下降,差异有统计学意义(P<0.05)。3、HIBD模型组中Spectrin aⅡ降解产物在模型建立后2h即开始增高,持续升高至48小时。各时间点蛋白表达水平较假手术组升高,差异有统计学意义(P<0.05)。E64D治疗组2h、6h、12h的蛋白表达水平较模型组下降,差异有统计学意义(P<0.05)。4. HIBD模型组左侧大脑含水量较假手术组增加,有显著统计学差异(P<0.01)； E64D治疗组与HIBD模型组左侧大脑含水量差异无统计学意义(P>0.05)。结论：1.缺氧缺血刺激海马神经元细胞自噬、凋亡、坏死发生增强；2.E64D抑制细胞凋亡、白噬和坏死,相关蛋白表达下降,减轻缺氧缺血造成的神经细胞死亡。3.缺氧缺血后左侧大脑含水量明显增加,出现脑水肿；4.应用蛋白酶抑制剂E64D没有减轻脑水肿的作用。