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目的:
本实验通过建立多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠动物模型,应用外用复方甘芍贴剂对其进行干预,通过观察该贴剂对PCOS 模型大鼠性激素、血糖、肝脏转氨酶及卵巢组织形态的影响,来探讨其作用机制。
方法:
选用70只6周龄SD 雌性未孕大鼠,有规律的动情周期,应用来曲唑(1mg/kg﹒d,共21d)灌胃建立多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠模型,完全随机分为正常对照组、PCOS 模型组、达英-35(炔雌醇环丙孕酮)组、复方甘芍胶囊组和外用复方甘芍贴剂组,每组14只。应用药物干预3周,3周后应用6%水合氯醛腹腔内麻醉大鼠,取下腔静脉血,离心,取血清,应用酶偶联速率法测定各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST);葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法(GOD-GPD)测定各组大鼠血糖;应用放射免疫法(RIA)测定各组大鼠的性激素水平;取双侧卵巢,置于10%的甲醛液中固定24小时,之后行病理切片及苏木素-伊红(HE)染色,应用光镜观察卵巢组织的形态学改变。
结果:
1.应用来曲唑建立PCOS大鼠模型,在用药12 d后,模型大鼠失去规律性动情周期,阴道涂片并行吉瑞氏染色,光镜下见模型组大鼠阴道涂片仅见大量白细胞,偶见少量角化细胞,提示模型组大鼠处于动情间期、无排卵;在用药21d后,检测大鼠血清性激素水平,模型组血清促黄体生成素(LH)、促卵泡生成素(FSH)及睾酮(T)水平模型组大鼠均高与对照组水平(P<0.05),而雌二醇(E2)、孕酮(P)水平低于正常对照组(P<0.05),证实模型的成功建立。
2.应用药物干预后,与PCOS模型组比较:外用复方甘芍贴剂组大鼠血清LH、T及FSH水平下降(P<0.05),血清E2、P水平升高(P<0.05);与其它三组比较:性激素水平无差异(P>0.05)。
3.卵巢组织形态学变化:与模型组比较,外用复方甘芍贴剂组大鼠卵巢外观红润,白膜不厚;光镜下可见大量发育成熟的卵泡,卵泡膜细胞层较薄,颗粒细胞增厚,多则至6~8层,偶见囊状未成熟卵泡;
4.血糖及转氨酶水平变化:与模型组比较,外用复方甘芍贴剂组大鼠血糖水平降低(P<0.05),肝转氨酶水平不变(P>0.05);与正常对照组比较,血糖及肝脏转氨酶均无显著差异(P>0.05);与复方甘芍胶囊组及空白对照组比较肝脏转氨酶水平较低(P<0.05)。
结论:
1.实验结果表明,应用来曲唑建立PCOS大鼠模型是一种较为理想的建模方法;
2.外用复方甘芍贴剂可降低大鼠FSH、LH、T及血糖水平,改善卵巢组织的结构形态,进而促进卵泡发育及排卵,这可能是其促进排卵的作用机制之一;
3.外用复方甘芍贴剂干预组大鼠肝脏转氨酶水平与模型组比较无差异,但低于达英-35组及复方甘芍胶囊组大鼠水平,提示该贴剂不增加大鼠肝脏的负担,体现了贴剂的作用优势。