宫颈癌中miRNAs差异性表达的实验研究

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目的:  探究宫颈癌患者血清及组织标本中miRNAs的表达情况,寻找差异性表达的miRNA,以期为宫颈癌的早期诊断和靶向治疗提供新的生物标记物。  方法:  (1)收集临床宫颈癌首诊患者和健康体检者的血清;  (2)收集临床宫颈癌患者术后肿瘤标本和行宫颈锥切术宫颈炎患者的宫颈组织;  (3)PCR对患者及对照组的高危型HPV感染情况进行分型检测;  (4)用miRNA array技术筛查宫颈癌患者血清中miRNA的表达谱;  (5)实时定量PCR检测各样本中miRNA的表达水平;  (6)Targetscan预测差异性表达miRNA的靶基因;  (7)实时定量PCR、免疫组化技术检测宫颈癌组织中靶基因的表达水平;  (8)统计学分析血清样本及组织标本中miRNA和靶基因的表达差异。  结果:  (1)miRNA array显示在宫颈癌患者血清中miR-34a、miR-27a、miR-221、miR-203、miR-205、miR-15b、miR-25、miR-222、miR-21、miR-200b及 miR-16较正常对照组有差异;  (2)qRT-PCR显示在宫颈癌患者血清中miR-34a呈低表达(P<0.05),miR-21、miR-200b及miR-221呈高表达(P<0.05);  (3)Targetscan预测miR-21、miR-200b和miR-221三个高表达的miRNAs的共同靶基因有AGO2、FOXN2、FOXP1、PKIA、PPP6C、CNOT6、TRPM3和BCL11B等8个,低表达的miR-34a的有PD-L1、HMGB1、c-Met和Bcl-2等;  (4)在宫颈癌组织中 miR-21(P<0.05)、miR-200b(P<0.01)及miR-221(P<0.05)呈高表达,miR-34a(P<0.05)呈低表达。miR-21、miR-200b和miR-221三个高表达的miRNAs的共同靶基因中有AGO2表达升高(P<0.01)、FOXP1和CNOT6表达降低(P<0.05),而miR-34a的靶基因PD-L1、HMGB1和c-Met的表达均升高(P<0.05)。  结论:  (1)U6在宫颈癌血清及组织中表达稳定,可以作为宫颈癌相关miRNA研究中的内参基因;  (2)miR-21、miR-34a、miR-200b和miR-221在宫颈癌血清及组织中均为差异性表达,且在组织和血清中的表达一致,可以作为宫颈癌早期诊断潜在的无创标记物;  (3)miR-21、miR-200b及miR-221三者在宫颈癌中为高表达,其共同靶基因AGO2表达上调、FOXP1和CNOT6表达下调,可能在宫颈癌发生发展中发挥一定的作用;  (4)miR-34a在宫颈癌中呈低表达,其靶基因PD-L1、HMGB1和c-Met表达升高,可能与宫颈癌的发生发展相关,这可能作为宫颈癌治疗的一个新的靶点。
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