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第一部分目的:探讨PKC亚型PKCα、PKCδ激活对膀胱癌细胞增殖活力的影响及机制。方法:使用PKC的特异性抑制剂(PKCα特异性抑制剂Safingol、PKCδ特异性抑制剂Rottlrein),及PKC激活剂处理膀胱癌BIU-87细胞株。PCR及Western检测下游蛋白表达,MTT法观察细胞增殖活力变化,流式细胞术检测对细胞周期的影响。结果:PKCα特异性抑制剂Safingol可明显抑制膀胱癌BIU-87细胞株增殖能力并呈剂量依赖性,且使细胞周期阻滞于G0/G1期,而PKCδ特异性抑制剂Rottlin则无此作用且能提升BIU-87细胞增殖能力;PKC激活剂PMA能明显提升BIU-87细胞增殖能力,且可使处于G2/M期的细胞明显增多,此外,我们发现Safingol明显抑制立早基因c-fos与c-jun的表达,而c-fos与c-jun表达与PKCδ活性无明显关系,而PMA且可明显促进表达。结论:PKC激活剂PMA促进膀胱癌细胞增殖能力,而PKCα抑制剂抑制膀胱癌细胞增殖能力,说明PKCα在膀胱癌增殖中起重要作用,而PKCδ抑制剂促进膀胱癌增殖,说明PMA促进膀胱癌增殖可能是因为激活PKCα亚型,也说明PKCα抑制剂对其它亚型无太大抑制作用。所以我们认为PKCα激活在膀胱癌增殖中起关键性作用,抑制其活性可明显抑制膀胱癌细胞增殖能力,推测是通过立早基因c-fos与c-jun起调节作用。第二部分目的:进一步探讨PLCε-PKCα信号通路在膀胱癌增殖中的调控及机制。方法:PLCεshRNA转染膀胱癌BIU-87细胞株,RT-PCR检测对内源性PLCε沉默情况,MTT法检测对细胞增殖能力影响,Western测定PKCα活性变化,RT-PCR及Western检测下游蛋白c-fos、c-jun表达变化;PKC抑制剂与激活剂处理转染shRNA细胞,MTT观察对增殖活力。结果:转染PLCεshRNA可明显抑制膀胱癌BIU-87细胞内源性PLCε表达;转染PLCεshRNA可明显抑制可明显抑制膀胱癌BIU-87细胞增殖活力、细胞周期被阻滞于G0/G1期,并使PKCα活性降低及立早基因c-fos、c-jun的表达减少;转染PLCεshRNA对膀胱癌细胞的抑制能力可被PKC激活剂PMA逆转,但如在加入PMA前或同时加入PKCα特异性抑制剂Safingol,则不会被逆转,而加入PKCδ抑制剂Rottlerin仍可被逆转。结论:PLCε与处于活性状态的PKCα都对膀胱癌增殖起促进作用,PLCε可激活PKCα,使处于活性状态的PKCα增多,沉默PLCε对膀胱癌增殖能力的抑制作用可被PKC激活剂PMA逆转,但如果同时抑制PKCα活性则不能被逆转,而PKCδ抑制则无此用,说明PKCα抑制剂有一定的特异性,此外,沉默PLCε可明显抑制c-fos与c-jun的表达,而c-fos与c-jun的表达也与PKCα活性呈正相关,这些结果提示PLCε对膀胱癌增殖能力促进作用可能由PKCα介导,PLCε-PKCα通路在膀胱癌增殖中起关键性调节作用,这种调节主要由立早基因c-fos、c-jun介导,并与细胞周期调节相关。