银杏叶黄酮组分抗氧化作用及对线粒体氧化损伤的研究

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该实验首先探讨了不同剂量紫外线的照射对细胞线粒体结构和功能的影响,在此基础上,研究银杏叶中不同黄酮类物质的抗氧作用及其能力的差别.筛选出其中抗氧化效果最好的组分,进一步探讨了该组分对紫外线导致的线粒体损伤的保护作用及其结构和组成,主要研究内容和结果如下:1.用75%乙醇回流提取和聚酰胺柱层的方法得到银杏叶总黄酮,继而用硅胶薄板对总黄酮进行制备性分离,得到6个组分.从紫外(λ=254nm)透射所显颜色和黄酮含量分析的结果看,银杏叶总黄酮主要集中在组分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中,而且根据黄酮物质在硅胶薄层上的层离行为与其结构关系的一般规律,分析组分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ不是同的黄酮甙类.2.小鼠肝细胞接受不同剂量(760μw/cm<2>的剂量率,分别照射0min,5min,10min,15min,20min,25min)的紫外线照射后,线粒体的结构和功能受到不同程度的损伤,而且具有明显的剂量依赖效应,这种损伤主要表现在脂质过氧化程度增大以及由此导致的线粒体膜流动性下降和细胞色素C氧化酶(CCO)活力的降低.在紫外线剂量为0.912J/cm<2>时,线粒体的脂质过氧化程度表到了大,选择这个剂量照射用不同银杏叶黄酮物质(组分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ以及总黄酮)处理(照射前共培养2h)的小鼠肝细胞,检测线粒体的脂质化氧水平并与对照组相比较,发现银杏叶黄酮具有较强的抗氧作用,明显地抑制了过氧化脂质的形成,其中组分Ⅱ的效果最好,当浓度为10.54μg/ml时,抑制率可达60.3%.3.组分对紫外线引起的线粒体的损伤有保护作用,而且具有剂量依赖性.组分Ⅱ可以显著抑制线粒体过氧化脂质的形成,线粒体膜流动性的降低以及CCO省略的下降,保护线粒体的结构和功能.另外,研究人员以体外培养细胞(NKM细胞株)为材料,利用微量量热学的方法,研究了组分Ⅱ的抗氧化作用,结果表明组分Ⅱ可以有效的保护细胞免受紫外线的氧化损伤.对组分Ⅱ的结构分析结果表明,组分Ⅱ是以一类以槲皮素为甙元与葡萄糖、鼠李糖或这两者形成的双糖结合而成的黄酮甙类.
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