拟南芥脲酶辅助蛋白AtureG基因的功能解析

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盐胁迫导致农作物产量降低的现象普遍存在。盐胁迫在种子萌发时期对于种子来说尤为敏感。脲酶(urease)是一个依赖镍离子的金属酶,在大多数植物和微生物体内用以分解尿素。在尿素代谢中,脲酶水解尿素生成氨和二氧化碳。在拟南芥(Arabidopsis thaliana)中,催化脲酶生物活性需要镍离子和三个辅助蛋白(ureD、ureF、ureG)的参与。三个脲酶辅助蛋白基因的表达特性分析结果表明,三个脲酶辅助蛋白基因在拟南芥的各个器官中均有表达,且在果夹中表达量最大;在种子萌发时期,AtureD和AtureF在吸胀过程中表达量都明显下调表达,而AtureG基因则上调表达;在种子萌发后期,NaCl胁迫和NH4Cl处理下,三个脲酶辅助蛋白均受到诱导表达,但在表达谱上AtureD和AtureF基因的表达特性有着高度的相似性,AtureG在表达谱上不同于其他两个基因,所以本研究中以AtureG为研究对象进行以下研究。利用PCR、Northern blot等手段对AtureG基因缺失突变体在DNA和RNA水平进行鉴定并得到了分别为外显子插入(atureG-1、cs352398)和内含子插入(atureG-2、 cs352350)的两个纯合突变体。以野生型拟南芥和脲酶基因缺失突变体(aturease)作为对照,脲酶活性分析的结果显示所得到的两个纯合突变体(atureG-1、atureG-2)均未检测到脲酶的活性。对野生型拟南芥、atureG-1和atureG-2在盐等逆境处理下的表型分析结果显示,在NaCl胁迫处理下,atureG-1和atureG-2可提高对盐胁迫的抗性,根长和鲜重都显著性高于野生型;在过量的NH4Cl处理下,atureG-1、atureG-2与野生型相比突变体在鲜重上略有优势。进一步对拟南芥野生型、atureG-1和atureG-2植株体内的尿素含量和NH4+含量进行了测定。研究结果显示:盐胁迫处理下,atureG-1和atureG-2体内的尿素含量高于野生型,而NH4+含量则低于野生型。最后,为了进一步了解AtureG基因在拟南芥植株体内的作用机制,我们构建了pGEX-6p-3-AtureG载体,并对其蛋白进行了诱导和纯化。结果得到了纯化后的AtureG蛋白。为今后在蛋白水平上的研究打下坚实基础。
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