目的：乙酰胆碱受体四聚体前体α亚单位(pcDNA3.1-AchRa-BirA)重组质粒转染至人胚肾细胞(HEK293)并在其细胞膜上获得稳定表达。为构建乙酰胆碱受体四聚体并将其作为抗原用于检测乙酰胆碱受体抗体的后续研究奠定基础。方法：构建重组质粒载体pcDNA3.1-AchRa-BirA,将其转化至感受态细胞E. coli DH5a中。扩增培养E. coli DH5a,提取重组质粒pcDNA3.1-AchRa-BirA,经限制性核酸内切酶EcoRV单酶切后,采用低熔点琼脂糖凝胶电泳检测,初步确定提取到质粒。设计引物,经生物公司合成并测序,验证其基因序列。将成功提取到的重组质粒pcDN A3.1-AchRa-BirA,采用脂质体转染法转染至HEK293细胞。经G418筛选后,形成集落状抗性克隆细胞。将表达产物扩大培养,应用免疫荧光技术,以异硫氰酸荧光素(FITC)标记,经荧光显微镜查看表达情况。结果：电泳检查发现了大小约为6964bp的条带,并经生物公司测得其基因全序列。转染后,G418筛选获得抗性克隆细胞,经荧光显微镜观察到HEK293细胞膜上的绿色荧光。结论：成功提取了pcDNA3.1-AchRa-BirA识别多肽序列基因重组载体。经荧光显微镜观察到HEK293细胞膜上的绿色荧光,证明AchRa-BirA基因成功转染至HEK293细胞膜上且有表达。