DNA聚合酶是普遍存在于生物体内执行DNA复制的关键酶。随着分子生物技术的飞速发展,越来越多的DNA聚合酶被发现并逐渐应用于包括PCR、定点诱变、高通量测序在内的生物学研究。在众多的DNA聚合酶中,来自B族的古菌DNA聚合酶因为具有良好的热稳定性、超群的保真性、一定的可加工性而受到越来越多研究者的欢迎。本文所研究的来自超嗜热古菌Thermococcus kodakarensis的KOD DNA聚合酶就属于这一家族,但市售的KOD DNA聚合酶产品大多来自于国外的公司,受到进口和专利等限制,价格较为昂贵。因此,开发出一种具有优良特性且价格有优势的KOD DNA聚合酶就显得尤为重要。本文利用Escherichia coli重组表达了KOD DNA聚合酶并对其生物活性进行了表征;同时通过定点突变的方法构建了KOD DNA聚合酶突变体,也对其生物活性进行表征;对重组KOD DNA聚合酶在PCR的应用过程中,通过添加了解旋酶或分子伴侣素的方法,构建PCR复合酶体系,针对PCR反应特异性、储存稳定性、损伤修复性进行研究,研究结果表明:在E.coli中表达出的重组KOD DNA聚合酶浓度最高可达5.436 mg/m L,纯度在90%以上,5’-3’聚合酶活力(比活)为1.02×104 U/mg,具有良好的3’-5’外切酶活性,能较好的以质粒为模板进行扩增,保真度在1.60×10-5左右;重组表达的KOD DNA聚合酶突变体L608P并未获得有效的生物活性;分别在PCR反应过程中添加了DNA解旋酶TK-Upf1及TTE0604,非特异性条带减少或消失,PCR反应的特异性得到提高;添加分子伴侣素Cpk A及Cpk B可使KOD DNA聚合酶在低温条件下的稳定期得到延长;此外Cpk A及Cpk B可一定程度修复损伤失活的重组KOD DNA聚合酶,其中Cpk A的修复率为57.5%,Cpk B的修复率为35.8%。本文研究结果对KOD DNA聚合酶的基础研究及应用开发提供了新的研究思路和实验依据。