利用基因芯片技术筛选Gemcitabine诱导胰腺癌Panc-1细胞凋亡相关基因的研究

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目的 胰腺癌是腹部外科最常见的恶性肿瘤之一,手术切除率低,预后差。吉斯他滨(Gemcitabine)可明显改善晚期胰腺癌病人的预后,诱导胰腺癌细胞凋亡,但其机制不清楚。本研究通过观察Gemcitabine诱导胰腺癌细胞凋亡前后凋亡相关基因表达的改变,筛选差异凋亡相关基因;并进一步用实时荧光定量PCR验证凋亡关键基因。探讨Gemcitabine诱导胰腺癌细胞凋亡的途径。 方法 体外培养胰腺癌细胞Panc-1,用四唑盐比色试验(MTT法)检测Gemcitabine对胰腺癌Panc-1细胞生长的抑制率,得到Gemcitabine抑制胰腺癌Panc-1细胞生长的半数有效浓度(IC50);流式细胞术(FCM)检测用IC50的Gemcitabine诱导后胰腺癌Panc-1细胞的凋亡率;分别用药物诱导组和对照组细胞mRNA逆转录标记探针,进行芯片杂交,筛选胰腺癌Panc-1细胞凋亡差异表达基因,分析凋亡差异表达基因与凋亡通路及凋亡调控的关系;用实时荧光定量PCR验证其凋亡通路关键基因ASK1。 结果 MTT法显示Gemcitabine抑制胰腺癌Panc-1细胞生长的IC50为50.33μg/ml;用50.33μg/ml浓度Gemcitabine培养细胞48小时后,细胞凋亡率明显升高(P<0.01);基因芯片筛选到17个差异表达凋亡相关基因,其中CyclinB1、ASK1、AKT2基因高表达,IRF-4、Scotin、14-3-3gamma、PDE、GRPS、TID1、AFP、STAT5、Sox-4、c-Rel、NDSO、htt、CatD、gD基因低表达;结果显示Gemcitabine诱导胰腺癌Panc-1
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