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[研究背景]间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs),是一种可以自我更新和分化为多个胚层细胞的多能细胞。目前,间充质干细胞已经从多种组织或器官中分离纯化获得,并且具有免疫调节的特点和不易形成畸胎瘤的安全性。上述特点使MSCs受到了广泛的关注,尤其是在再生医学和组织工程领域。本实验室前期的研究已经从小鼠骨髓中分离纯化得到原始的间充质干细胞,并应用干细胞表面标志Sca-1对所获得的细胞进行纯化,得到了Sca-1+MSCs亚群,这种细胞亚群具有成骨分化和脂肪形成的能力,并且具有一定的免疫调节特性。同时发现,Sca-1+MSCs细胞亚群具有诱导造血干祖细胞分化生成调节型树突状细胞(DC)的特性,并在细胞的形态、表面标志和体内体外功能等方面研究了所诱导生成的DC所具有的生物学特点,初步表明MSCs可以影响DCs的命运。然而MSCs对不成熟树突状细胞(imDCs)命运的影响及其作用机制尚不清楚,本论文则集中讨论Sca-1+MSCs细胞亚群对imDCs的免疫调节作用以及机制。[研究目的]1.从小鼠骨髓中分离纯化Sca-1+MSC,并研究其免疫调节作用,尤其是对imDC命运的影响；2.比较三种DC亚群的特点,寻找与之相关的转录因子;3.研究Notch抑制剂(DAPT)在Sca-1+MSC诱导调节性DC生成中的作用。[研究方法]1.磁珠分选纯化Sca-1+MSC,检测其生物学特性,包括生长曲线、细胞周期、细胞表型鉴定以及成脂成骨分化能力；2.体外培养imDCs和maDCs,并将Sca-1+MSC和imDCs共培养,流式细胞术检测调节型DC的生成,ELISA实验寻找共培养体系中发挥关键诱导作用的细胞因子,Western bloting实验检测不同DC亚群之间转录因子表达的差异。[研究结果]1.小鼠骨髓中存在Sca-1+MSC:2.Sca-1+MSC具有非常典型的干细胞特征：梭形或纺锤形的形态、对数期生长曲线、G0/G1期细胞比例高、高表达干细胞表面分子,以及具有分化为脂肪细胞和成骨细胞的能力。3.Sca-1+MSCs能够诱导imDC生成CD11bhighlalowCDllclow regDCs,与imDCs口maDCs在细胞表型、细胞因子分泌和细胞转录因子表达等方面均有所不同。4.Sca-1+MSCs抑制imDCs的成熟,LPS的作用也不能使其发生改变。5.IRF8与炎性因子(IL-12、TNF-α)的分泌有关,在regDC中,IRF8表达量下调,ELISA结果显示IL-12和TNF-a的分泌水平降低,而IL-10的分泌水平较高,这表明Sca-1+MSCs对其具有一定的调节作用。6.在培养体系中加入Notch抑制剂(DAPT)后,IRF8表达量重新上调,IL-12和TNF-α的分泌水平也随之升高,提示Notch抑制剂(DAPT)可以改变Sca-1+MSCs对imDCs的诱导作用。[结论]Sca-1+MSC能够诱导imDCs分化生成CD11bhighlalowCD11clow调节型DC,表现出免疫调节作用,而Notch抑制剂(DAPT)可以影响Sca-1+MSC的免疫调节作用。