抗坏血酸碳点对骨髓基质细胞内线粒体影响的体外研究

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目的:口腔颌面部骨组织的缺损一直是临床常见的疾病之一,在纳米材料促成骨的系列研究过程中,已经证明抗坏血酸碳点具有促成骨功能,但是这种新型的碳点纳米材料是否与其他纳米材料一样对细胞具有毒性作用并不清楚。本研究从亚细胞角度分析,探索抗坏血酸碳点对骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)内线粒体的影响,从而为抗坏血酸碳点在成牙槽骨方面的研究及应用提供依据。方法:1、从维斯塔大鼠股骨内提取骨髓基质细胞并进行体外培养,取第3到5代细胞与抗坏血酸碳点共培养0h、24h、48h、72h后进行实验。2、选取最佳实验浓度:四唑盐比色法(MTT)检测不同浓度抗坏血酸碳点对骨髓基质细胞增殖能力的影响,并选取最佳实验浓度;3、检测细胞内ROS的含量:CM-H2DCFDA染色检测细胞内ROS的量;4、检测对线粒体形态的影响:透射电镜观察线粒体形态;5、检测对线粒体结构的影响:JC-1染色后镜下观察线粒体结构;6、检测对线粒体功能的影响:Western Blot检测AMPKα的表达,ATP检测试剂盒检测ATP产量。结果:1、随着抗坏血酸碳点浓度的增高,骨髓基质细胞的增殖能力下降;并选取最佳实验浓度40μg/m L;2、随着共培养时间的延长,细胞内ROS含量上升;3、随着共培养时间的延长,线粒体的形态逐渐发生裂变、固缩、空泡样改变;4、随着共培养时间的延长,线粒体膜电势降低;5、随着共培养时间的延长,AMPKα表达上升,ATP产量下降。结论:低浓度(浓度<40μg/mL)的抗坏血酸碳点对骨髓基质细胞的影响较小;高浓度(浓度>40μg/m L)的抗坏血酸碳点随着浓度的升高及共培养时间的延长,抗坏血酸碳点可以引起骨髓基质细胞内ROS产量增多,线粒体的形态改变、结构丧失、功能减退。
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