本实验的目的在于研制出一种以有效部位为主的植物性杀菌剂来防治药用植物的病害,对生产符合GAP标准的龙胆药材以及无公害农药的研制工作具有重要意义。 本研究分别从化学和药效学两方面对知母抗龙胆斑枯病病原菌的活性部位进行筛选,最终确定了知母总皂菅类成分是高效的抗菌活性部位,其最低抑菌浓度为0.02g/ml。为了使其抗菌作用更好地发挥,以菝葜皂苷元的含量为指标,采用正交设计表和紫外分光光度法对知母总皂苷类成分的提取工艺进行优化,并确定了最佳提取工艺为:75%乙醇5倍生药量加热回流提取3次,每次2小时。 接着以菝葜皂苷元的含量为指标,采用大孔树脂法定向地富集有效成分,首先优选出AB-8型大孔吸附树脂,确定了上样量为1:5(提取物:树脂),样品浓度为0.5g/ml,吸附流速为1.0ml/min,洗脱流速为2.0ml/min。然后通过对影响富集的各种参数进行考察,最后确定了制备工艺为:水洗脱(5BV)→40%乙醇洗脱(7BV)。按以上制备工艺制得的知母总皂苷的含量为66.48%。该部位的制备为下一步药效实验的顺利进行打下了坚实的基础。 最后以菝葜皂苷元为对照品,通过线性范围的研究;精密度、稳定性、重现性及加样回收率的方法学考察,建立了知母总皂苷的含量测定方法,对其实行了质量监控,并通过抑菌试验验证了按以上工艺方法制备的知母总皂苷对龙胆斑枯病有较好的抑菌作用,其最低抑菌浓度为0.02g/ml,为今后生产及使用提供了可靠的依据。