目的：研究慢性炎症因素对角膜上皮干细胞活性及衰老的影响，并进一步探讨其作用机制。　　方法：　　1.建立角膜上皮干细胞模型：采用含BPE和EGF的KSFM培养基培养小鼠角膜上皮干/祖细胞系(TKE2)；在所有试验开始前，均换用仅含EGF不含BPE的KSFM培养基处理1天；用10 ng/ml IL-1β或TNF-α连续处理角膜上皮干细胞8天；进行如下实验：　　（1）炎性分子对细胞增殖/分化的影响:免疫荧光染色检测不同炎症因子处理的各组细胞Ki67、importin13、CK3/12、involucrin荧光强度的变化。收集样本，Western blot法检测各组细胞importin13、Bmi1表达。　　（2）炎性分子对角膜上皮干细胞衰老的影响：免疫荧光染色及Western blot法检测不同炎症因子处理的各组细胞p16表达的变化,荧光探针DCFH-DA检测细胞内ROS水平。　　（3）炎性分子对STAT3信号通路影响：免疫荧光染色及Western blot法检测不同炎症因子处理的各组细胞p-STAT3表达的变化。　　2.建立正常c57BL/6小鼠及p16ink4a缺失小鼠角膜上皮刮除模型，进行如下实验：　　（1）小鼠角膜上皮损伤修复情况的观察：小鼠角膜上皮刮除术后24、48、72小时行荧光素钠染色，裂隙灯照相，Image J软件统计角膜上皮的缺损面积。　　（2）p16ink4a缺失对角膜上皮细胞增殖、干细胞干性的影响：小鼠角膜上皮刮除术后48h，处死取眼球，制作8μm冰冻切片，进行免疫荧光染色检测ki67、ABCG2的表达变化。分别收集正常c57BL/6小鼠及p16ink4a缺失小鼠角膜上皮，Western blot法检测Bmi1的表达，real time PCR检测p63、ABCG2的表达变化。　　（3）p16ink4a缺失对STAT3信号通路的影响：小鼠角膜上皮刮除术后48h，分别采用免疫荧光染色和Western blot法检测正常c57BL/6小鼠及p16ink4a缺失小鼠角膜上皮p-STAT3表达的变化。　　（4）p16ink4a缺失对角膜上皮细胞抗氧化因子表达的影响：小鼠角膜上皮刮除术后48h，Western blot法检测正常c57BL/6小鼠及p16ink4a缺失小鼠角膜上皮SOD2表达的变化，PCR检测相关抗氧化基因表达的变化。　　结果：　　1．IL-β和TNF-α处理可以抑制TKE2细胞的增殖、干性并促进其分化。炎性分子处理TKE2细胞后，与正常对照组相比，细胞增殖标记Ki67表达明显下降，干细胞标记importin13、Bmi1表达显著下调，差异有统计学意义（P＜0.05）。而角膜上皮分化标记CK3/12、involucrin的表达显著上调。　　2．IL-β和TNF-α处理可以诱导TKE2细胞衰老。炎性分子处理TKE2细胞后，与正常对照组相比，细胞衰老的典型标记p16的表达显著增强，差异有统计学意义（P＜0.05），且伴随着活性氧ROS的大量聚集。　　3. IL-β和TNF-α处理可以抑制STAT3活化。炎性分子处理TKE2细胞后，与正常对照组相比，角膜上皮细胞STAT3的活化状态p-STAT3的表达显著下降，差异有统计学意义（P＜0.05）。　　4. p16ink4a缺失促进角膜上皮损伤修复。p16ink4a缺失小鼠角膜上皮刮除后，上皮再生能力更强，与正常c57BL/6小鼠相比可以显著促进小鼠角膜上皮的愈合速度。　　5. p16ink4a缺失促进角膜上皮细胞的增殖和干细胞活性。p16ink4a缺失小鼠角膜上皮在损伤修复过程中细胞增殖标记Ki67表达更强，干细胞标记ABCG2、Bmi1、p63的表达更强。　　6. p16ink4a缺失能够活化角膜上皮细胞STAT3信号通路。角膜上皮刮除术后48h， p16ink4a小鼠角膜上皮细胞中p-STAT3荧光强度均明显强于正常c57BL/6小鼠；Western blot检测p16ink4a小鼠角膜上皮细胞中p-STAT3的表达明显增强，差异有统计学意义（P＜0.05）。　　7. p16ink4a缺失促进角膜上皮细胞抗氧化因子的表达。角膜上皮刮除术后48h，p16ink4a小鼠角膜上皮细胞中SOD2的表达显著增强，且抗氧化基因SOD2、Catalase、Hmox1、GCLC、TXN的表达均明显上调。　　结论：炎性因子IL-1β、TNFα等持续存在下，角膜缘干细胞的活性丧失，出现衰老特征，p16的表达显著增加，并显著抑制STAT3的活化。而p16ink4a缺失能够促进角膜上皮的损伤修复，并促进 STAT3的活化，增强角膜上皮的抗氧化能力。说明慢性炎症可能通过对p16ink4a/STAT3相关信号通路的调节来影响角膜上皮干细胞的活性。