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目的:探索LSM4基因在子宫内膜组织是否表达及其与子宫内膜蜕膜化的关系,为阐明蜕膜化机制提供新的途径。方法:1.应用原位杂交(ISH)和免疫组织化学(IHC)技术,分别从m RNA和蛋白水平观察LSM4在小鼠子宫内膜的表达及其与孕期子宫蜕膜化的关系;2.应用体外培养子宫内膜基质细胞并诱导蜕膜化实验模型和实时定量PCR技术,检测蜕膜化中LSM4-m RNA表达动态;3.应用RNAi技术对原代基质细胞进行LSM4基因敲降(LSM4-KD)继而诱导蜕膜化,并对LSM4-KD细胞检测蜕膜化标志分子蜕膜催乳素相关蛋白(DPRP)和碱性磷酸酶(AP),考察LSM4基因表达下调是否抑制基质细胞蜕膜化。结果:1.ISH和IHC相互呼应地显示,孕第1天LSM4基因的m RNA和蛋白均表达于子宫内膜腔上皮和腺上皮;植入窗口期的第4天,在上皮和紧邻腔面上皮的子宫内膜浅层基质中有一部分基质细胞LSM4基因显著表达;第5天之后LSM4在上皮表达下调,转而主要表达于内膜基质细胞,与子宫内膜的蜕膜化基本同步;内膜基质层内LSM4阳性细胞随蜕膜化进展而增多,并从内膜浅层扩展到全层,而植入胚周围的浅层基质中阳性细胞则继而减少;至蜕膜化高峰的孕第8天,基质细胞内LSM4-m RNA杂交信号显著减弱,但蛋白阳性信号依然很强;LSM4蛋白同时分布于蜕膜细胞的胞核和胞质,在胞质中LSM4蛋白呈网络状/颗粒状聚集并附着于细胞边界。2.在体外诱导蜕膜化进程中,基质细胞LSM4-m RNA相对拷贝数从0h~96h逐日降低(P<0.05);在LSM4-KD实验的阴性对照组中,LSM4-m RNA也呈下降趋势且与DPRP的表达趋势相反。3.与对照组相比,感染LSM4-sh RNA的基质细胞LSM4-m RNA表达量降低极其显著(P<0.01),确认了LSM4基因的敲降(LSM4-KD)。LSM4-KD细胞的DPRP-m RNA相对表达量在蜕膜化48h时显著低于对照组(p<0.05),96h更显著(p<0.01)。对同一种细胞LSM4/DPRP的m RNA量进行相关分析,虽然实验组LSM4-KD导致两者的量均极低,但在蜕膜化的同一时间点,LSM4/DPRP表达量之间有一定相关性。24h两者呈高度正相关,48h却呈高度负相关,而96h时又呈高度正相关。提示LSM4与DPRP可能存在某种调节关系。4.LSM4-KD细胞在蜕膜化96h时,AP活性普遍显著减弱,细胞体积也较小。结论:1.首次发现LSM4基因在小鼠孕早期的子宫内膜呈现时空规律性表达,即围绕植入和蜕膜化起始时段的升高波动和从腔上皮到深层基质的组织空间波动,此组织空间波动也是基质细胞个体蜕膜化起始时段的升高波动;2.首次验证LSM4基因的敲降显著抑制了蜕膜化标志基因DPRP和AP的表达,证明LSM4对基质细胞的蜕膜化起关键作用;3.推测LSM4基因很可能是子宫内膜基质细胞蜕膜化的启动因子,也可能还是子宫内膜接受态的构成分子。