中国人乳和牛乳防御素含量特征及功能研究

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目的:目前母乳缺乏现象非常普遍。婴幼儿配方奶粉成为首选的代乳品。研究分析中国人群的母乳成分,探索研制适合中国婴幼儿的配方奶粉具有十分重要的意义。防御素是固有免疫的重要组成成分。然而,国外有关母乳中防御素的研究为数不多,且未能对其动态变化及功能进行探索;国内这方面的研究未见报道。本研究旨在对人乳和牛乳中的防御素含量和功能进行研究,为其在婴幼儿配方奶粉等功能性食品中的应用奠定理论基础,同时为国内深入开展防御素的研究提供科学、准确的测定方法和参考数据。方法:(1)本研究用酶联免疫吸附实验方法检测健康中国人初乳和成熟乳中人β-防御素(human β-defensins,hBD)-1和人β-防御素-2的浓度;用荧光定量PCR技术检测中国人初乳和成熟乳中人β-防御素-1和人β-防御素-2的mRNA表达水平。(2)用多元线性回归等统计学方法分析其影响因素;随访研究人乳β-防御素含量与婴儿常见疾病的可能联系;(3)用酶联免疫吸附实验方法检测配方牛乳和健康奶牛新鲜乳汁中“牛中性粒细胞β-防御素”(Bovine neutrophilbeta-defensin,BNBD)的浓度。(4)用体外药敏试验的方法分析人β-防御素-1,-2和-3对人源性肠道益生菌的抗菌活性并探索相关机制。结果:(1)初乳hBD-1的浓度范围1.04-12.81μg/ml;初乳hBD-2的浓度范围0.31-19.12ng/ml;成熟乳hBD-1的浓度范围1.03-31.76ng/ml;成熟乳hBD-2的浓度范围0.05-0.18ng/ml;母乳hBD-1和hBD-2浓度呈动态变化。初乳hBD-1的浓度明显高于成熟乳,差异有统计学意义(P<0.001);初乳hBD-2的浓度明显高于成熟乳,差异有统计学意义(P<0.001);初乳中hBD-1mRNA表达水平明显高于hBD-2(P<0.001),成熟乳中hBD-1mRNA表达水平明显高于hBD-2(P<0.001)。(2)多元线性回归分析结果显示初乳loghBD-1与孕前BMI相关(P=0.001),初乳loghBD-2与分娩方式相关(P=0.006),成熟乳loghBD-1与孕周相关(P=0.01);高hBD-1组的上呼吸道感染发生率与低hBD-1组相比,高hBD-1组的发生率较低,该差异有统计学意义(χ2=4.995, P=0.025)。(3)配方牛乳中BNBD-1和BNBD-2的浓度范围明显低于人初乳hBD-1,稍低于人初乳hBD-2和人成熟乳hBD-1浓度范围;配方牛乳中BNBD-1和BNBD-2的浓度范围,明显低于新鲜牛初乳和成熟乳;新鲜牛初乳和成熟乳中BNBD-1和BNBD-2的浓度呈现动态变化特征。(4)hBD-1,-2和-3对长双歧杆菌(Bifidobacterium longum,B.infitis)JDM301、乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis,B. lactis) HN019和鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus GG,LGG)没有明显的杀伤作用;外排泵抑制剂CCCP可以显著增加hBD-1,-2,-3对B.infitis JDM301和B. lactis HN019的抗菌活性。结论:人初乳和成熟乳中含有一定浓度的hBD-1和hBD-2,且初乳含量更为丰富。孕前BMI是初乳hBD-1的影响因素,分娩方式是初乳hBD-2的影响因素,孕周是成熟乳hBD-1的影响因素。初乳中高浓度hBD-1对婴儿生后6个月内上呼吸道感染的发生有预防作用。配方牛乳中BNBD-1和BNBD-2含量很低;新鲜牛乳中含有丰富的BNBD-1和BNBD-2。hBD-1,-2,-3对B.infitis JDM301,B. lactis HN019和LGG无明显杀伤作用;B.infitis JDM301和B. lactis HN019对hBD-1,-2和-3的耐药与外排泵有关。
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