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金黄色葡萄球菌是一种常见的食源性致病菌,由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒事件频繁发生。发展一种对金黄色葡萄球菌的快速检测方法具有重要的意义,目前对金黄色葡萄球菌的检测方法主要包括传统培养法、免疫学检测法、分子生物学检测法,这些方法都存在不可避免的缺点,传统培养法检测周期长,操作繁琐;免疫学检测法检测灵敏度低;分子生物学检测法操作过程比较复杂,不利于现场快速检测,因此建立一种简单、快速的对食源性致病菌金黄色葡萄球菌的检测方法是必不可少的。本文构建了一种新的链交换扩增(Strand Exchange Amplification,SEA)检测方法,该方法采用变性气泡介导的链交换原理,在等温条件下1小时内完成扩增反应,结合比色法,仅需要一台金属浴就可以完成对金黄色葡萄球菌的检测,结果判定肉眼可视化,检测过程简单、快速。本文用SEA法对金黄色葡萄球菌进行了可行性研究,实现了对金黄色葡萄球菌检测方法的建立。为了进一步实现SEA检测方法对实际样品的检测能力,用SEA法对金黄色葡萄球菌进行了灵敏性、特异性、抗干扰性研究,检测限低至1.0×10~-1414 M。SEA检测方法分别检测了总核酸(DNA和RNA)、DNA和RNA,实验结果表明SEA检测方法实现了无需额外的反转录可以一步法检测金黄色葡萄球菌RNA,并且检测RNA的效率高于检测DNA的效率。检测结果判别可以荧光判读,也可以通过反应体系颜色的转变,肉眼比色判读检测结果,结果操作简单便捷,不依赖于专业人员、昂贵仪器,检测结果准确。SEA方法的建立主要是为了对实际样品的检测,因此,本论文又对人工加标的猪肉样品进行检测,结果表明,SEA法最低可以检测到浓度为2 cfu/g污染的人工加标猪肉制品,满足对金黄色葡萄球菌检测标准的要求,然后又进一步对市场上抽样的112份肉制样品牛肉、猪肉、鸡肉、鱼干和火腿肠进行检测,结果表明用SEA法与传统的培养方法对比研究,SEA检测阳性率与传统培养法一致。说明SEA检测实际样品中的金黄色葡萄球菌方法可靠,有实际应用价值。本文构建了全新的RNA一步法等温扩增技术平台,整个检测过程具备简单、快速、无设备、可视化的特点,SEA检测方法也可集成到微流控芯片中,实现样本在单个设备中应答诊断,为食品中的其他致病菌提供一个即时检测平台。