论文部分内容阅读
Importinl3(IP013)是importinβ家族中最新发现的新成员,是该家族中唯一具有双向转运功能的受体蛋白,它可介导一些与细胞发育和生理功能密切相关的重要蛋白质的核输入和核输出。本研究通过免疫学染色和RT-PCR检测IP013在人角膜组织、角膜上皮细胞原代培养和克隆培养中的特异性表达;并且利用人角膜边缘上皮细胞克隆培养和小鼠角膜/边缘上皮前体细胞系TKE2细胞(the murinelimbal/corneal epithelium-derived progenitor cell line)为研究对象,并以IP013抑制剂——Ran G19V/Q69L处理,或转换培养基(TKE2)研究IP013对角膜上皮前体细胞增殖与分化的调控。IP013主要在人角膜缘上皮基底细胞的核内高表达,在胞质内弱表达,但在角膜缘其他细胞层和中央角膜上皮的全层均无表达。在角膜缘上皮细胞克隆形成早期,IP013主要表达于克隆内的上皮细胞;随克隆培养时间的延长,阳性表达IP013的细胞逐渐减少并局限于克隆的边缘区域。培养于KSFM培养基中的TKE2细胞阳性表达IP013;TKE2细胞转培养于加有FBS的DMEM培养基中的方法可促进TKE2细胞的分化,此时IP013表达转为阴性。以不同浓度IP013抑制剂——Ran G19V/Q69L处理人角膜边缘上皮细胞克隆培养和TKE2细胞后,IP013在两者中的表达明显下调,人角膜边缘上皮细胞的克隆形成率和克隆生长能力、TKE2细胞增殖能力明显降低,并促进人角膜边缘上皮克隆内干细胞和TKE2细胞向成熟角膜上皮细胞分化。我们的研究结果首次证实:IP013在角膜上皮干细胞中特异性表达,并在维持角膜上皮干细胞表型、低分化状态和高增殖潜能中起到重要的调控作用:IP013可作为一个新的角膜上皮前体细胞标志物。