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[目的] 1.通过分子克隆技术表达和纯化2种不同梅毒螺旋体株来源TP0136重组蛋白。 2.评价2种TP0136重组蛋白在梅毒分期诊断中的意义。 [方法] 1. TP0136原核表达载体的构建及鉴定 从GenBank获取梅毒螺旋体Nichols Seattle株TP0136(NST）和Nichols Houston株TP0136（NHT）基因序列，用Primer5.0设计序列引物，高保真酶扩增全长基因。将PCR产物分别与载体连接，构建TP0136重组蛋白原核表达载体pEXP-5-CT-TOPO-TP0136，转化到TOP10 E.coli中诱导目的蛋白表达。利用SDS-PAGE、Western blot对表达产物进行分析、鉴定；Ni2+-NTA亲和层析柱纯化重组蛋白，BCA法测定蛋白浓度。 2.不同病期梅毒患者血清中TP0136抗体水平测定 将NST和NHT株重组蛋白作为包被抗原，采用间接ELISA法分别检测不同病期梅毒患者血清中TP0136抗体水平差异。 [结果] 1. TP0136原核表达载体的构建和鉴定 通过PCR得到NST和NHT全基因片段，分别为1260 bp和1389 bp。将pEXP-5-CT-TOPO-TP0136重组表达载体测序分析证实分别含有NST和NHT基因序列。 2. TP0136蛋白表达与纯化 含TP0136表达载体的TOP10 E.coli在IPTG浓度为1 mM，诱导时间为10 h时，成功表达相对分子量约50 kDa可溶性目的蛋白；从包涵体中获得的蛋白纯度在90%以上；BCA法测得NST、NHT重组蛋白浓度分别为1.2 mg/ml、0.7 mg/ml。 3.不同病期梅毒患者血清中TP0136抗体水平 以NST和NHT重组蛋白作为包被抗原的间接ELISA法检测发现：早期梅毒患者血清中TP0136抗体水平明显高于晚期梅毒（NST：t=8.171，P=0.001；NHT：t=8.965，P=0.001），有症状梅毒患者血清中TP0136抗体水平明显高于隐性梅毒（NST：t=4.989，P=0.001；NHT：t=3.810，P=0.001）；未治疗梅毒患者血清中TP0136抗体水平明显高于治疗后患者（NST：t=5.040，P=0.001；NHT：t=2.288， P=0.001）；治疗后非血清固定患者血清中TP0136抗体水平明显高于血清固定患者（NST：t=10.315，P=0.001；NHT：t=6.342，P=0.001）。 非神经梅毒患者血清中NHT株TP0136抗体水平明显高于神经梅毒患者（t=2.555，P=0.012），而NST株TP0136抗体水平在神经梅毒和非神经梅毒患者间差异无统计学意义（t=0.239，P=0.811）。 [结论] 1.成功表达和纯化了NST和NHT株TP0136重组蛋白。 2.不同病期梅毒患者血清中NST和NHT株TP0136抗体水平存在差异，可能具有潜在的临床诊断价值。