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目的急性髓系白血病(Acute myeloid leukemia,AML)是成人最常见的白血病类型,目前临床上常用的化疗方案及造血干细胞移植术,虽然能够缓解、治愈一部分患者,但是存在着高耐药率、高复发率的风险,患者的长期无病生存率并没有得到明显的改善,开发新的治疗AML的药物,仍十分重要。本研究以AML细胞株Kasumi-1、KG-1及HL60为研究对象,观察双氢青蒿素(Dihydroartemisinin,DHA)对AML细胞株的活性抑制能力及促凋亡能力,探索其促凋亡机制,为开发具有临床治疗价值的药物提供依据。方法1.采用CCK-8法检测DHA对Kasumi-1、KG-1和HL60细胞活力的影响;2.采用PI染色法,观察DHA对Kasumi-1细胞的活性抑制作用;3.采用细胞免疫组化法检测Kasumi-1细胞内Cleaved-Caspase3蛋白的表达水平;4.采用流式细胞仪检测DHA对HL60细胞的凋亡诱导作用;5.加入泛凋亡抑制剂Z-VAD-FMK检测其对Kasumi-1细胞内Cleaved-Caspase3蛋白表达水平以及细胞活力的影响;6.采用Western Blot法分析细胞凋亡相关蛋白、PTEN/AKT通路中蛋白质表达水平的变化。结果1.DHA对AML细胞株生长抑制的影响:CCK-8法检测发现DHA可呈剂量依赖性抑制三种AML细胞的活力;PI染色可观察到DHA可呈剂量依赖性促进AML细胞死亡。2.DHA诱导AML细胞凋亡:细胞免疫荧光检测发现,与对照组相比,接受DHA处理后的AML细胞,Cleaved-Caspase3蛋白表达水平明显增加;流式细胞仪凋亡检测显示,与对照组相比,DHA处理组可呈剂量依赖性诱导AML细胞凋亡,尤其是晚期凋亡。Western Blot检测发现DHA作用于AML细胞后,促凋亡相关蛋白Cleaved-caspase3、c-PARP表达水平增加。3.DHA诱导的AML细胞凋亡可被Z-VAD-FMK试剂恢复:细胞免疫荧光发现,泛凋亡抑制剂Z-VAD-FMK能削弱经过DHA处理后的Kasumi-1细胞Cleaved-caspase3蛋白表达的增加。CCK-8检测发现,泛凋亡抑制剂Z-VAD-FMK可将DHA处理后的Kasumi-1细胞活力显著恢复;4.DHA诱导AML细胞凋亡的过程中伴随着PTEN、p-AKT蛋白的变化:Western Blot检测,发现与对照组相比,DHA呈剂量依赖性地上调Kasumi-1细胞中PTEN蛋白的表达水平,下调p-AKT蛋白的表达水平,降低p-AKT/AKT蛋白的表达比值。结论1.DHA在体外能够通过诱导细胞凋亡来抑制AML细胞的增殖。2.PTEN/AKT通路可能参与了DHA抗AML机制。