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实验目的:本研究的目的是验证eIF5A2基因在非小细胞肺癌侵袭转移和顺铂耐药中的作用及其机制,并进一步探讨MicroRN A-9/eIF5 A2通路在调控非小细胞肺癌的侵袭转移和顺铂耐药中的作用及其机制材料与方法:1.选择4种非小细胞肺癌细胞株(A549、HCC827、NCI-H358、NCI-H1299),利用Western-blot和RT-PCR技术检测eIF5A2的表达,选取eIF5A2高表达的NCI-H1299细胞和eIF5A2低表达的A549细胞,采用RNAi干扰技术抑制肺癌细胞系中eIF5A2表达,观察其迁移侵袭能力的变化。2.采用TGF-β1诱导A549细胞发生EMT,采用RNAi干扰技术抑制肺癌细胞系中eIF5A2表达,检测肺癌细胞中EMT相关蛋白表达水平、迁移侵袭能力的变化。3.采用GC7(eIF5A2抑制剂)抑制A549、NCI-H1299肺癌细胞eIF5A2的表达,细胞活力检测试剂盒(CCK-8)检测肺癌细胞对顺铂化疗敏感性的变化,采用RNAi干扰技术抑制肺癌细胞系中eIF5A2表达,Western-blot和免疫荧光技术检测EMT标志物表达的变化。4.检测A549、NCI-H1299肺癌细胞miR-9的表达,采用miR-9mimic和miR-9 inhibitor分别上调/下调肺癌细胞中miR-9的表达,划痕实验和Transwell侵袭实验检测肺癌细胞迁移侵袭能力的变化,RT-PCR检测eIF5A2表达水平的变化,Western Blot检测EMT标志物表达水平的变化。5.采用 miR-9 mimic 和 miR-9 inhibitor 分别上调/下调 A549、NCI-H1299、NCI-H358肺癌细胞中miR-9的表达,CCK-8检测试剂盒、EDU法、流式细胞技术分别检测肺癌细胞经顺铂化疗后细胞活力、增殖能力和凋亡水平的变化。结果:1.A549肺癌细胞eIF5A2低表达、NCI-H1299肺癌细胞eIF5A2高表达,eIF5A2 siRNA质粒转染能显著下调eIF5A2的表达,而eIF5A2的表达水平和肺癌细胞的迁移侵袭能力呈正相关。2.通过下调A549肺癌细胞eIF5A2表达,能抑制TGF-β1诱导的A549细胞的EMT过程,从而降低肺癌细胞的迁移侵袭能力。3.A549、NCI-H1299肺癌细胞eIF5A2的表达水平与顺铂的化疗敏感性呈负相关,而eIF5A2通过调控EMT过程从而调控肺癌细胞对顺铂的耐药性。4.A549、NCI-H1299肺癌细胞中miR-9的高表达能下调eIF5A2的表达,并通过逆转EMT过程降低肺癌细胞的迁移侵袭能力。5.A549、NCI-H1299、NCI-H358肺癌细胞中miR-9的表达与顺铂的化疗敏感性呈正相关,miR-9的高表达通过下调eIF5A2的表达,并逆转EMT过程提高肺癌细胞对顺铂化疗的敏感性。结论:本研究结果表明,在非小细胞肺癌细胞系中eIF5A2表达水平与侵袭转移能力呈正相关,而上调eIF5A2的表达能诱导肺癌细胞对顺铂的耐药,其机制可能与EMT过程密切相关。进一步研究发现,MicroRNA-9/eIF5A2通路能调控非小细胞肺癌细胞的迁移侵袭能力和对顺铂的耐药,其机制可能与EMT过程密切相关。