【摘 要】
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Exendin-4是从希拉毒蜥唾液中分离的一种多肽激素,由39个氨基酸残基组成,与胰高血糖素样肽1（GLP-1）有53%的同源性,是GLP-1受体激动剂,与GLP-1类似,Exendin-4可调节血糖浓度,但GLP-1的半衰期仅有2min,而Exendin-4半衰期却长达9.57h,因此在治疗2型糖尿病方面具有广阔的前景。根据Gene Bank中登录的Exendin-4的基因序列,结合大肠杆菌的密
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Exendin-4是从希拉毒蜥唾液中分离的一种多肽激素,由39个氨基酸残基组成,与胰高血糖素样肽1（GLP-1）有53%的同源性,是GLP-1受体激动剂,与GLP-1类似,Exendin-4可调节血糖浓度,但GLP-1的半衰期仅有2min,而Exendin-4半衰期却长达9.57h,因此在治疗2型糖尿病方面具有广阔的前景。根据Gene Bank中登录的Exendin-4的基因序列,结合大肠杆菌的密码子偏嗜性,对原有基因70%的密码子进行改造,使其在大肠杆菌中高效表达;添加合适的限制性内切酶位点和肠激酶识别位点,构建两个重组表达载体pRSET B-Exendin-4和pET-32a（+）-Exendin-4,分别转化表达菌株大肠杆菌BL21系列菌株,只有表达载体pET-32a（+）-Exendin-4成功表达目的蛋白。在30℃条件下1 mmol/L的IPTG诱导表达6 h,融合蛋白表达量占细菌蛋白总量的32%。利用亲和层析纯化融合蛋白,每克湿菌体可获得融合蛋白6.44 mg。利用肠激酶切除融合蛋白的N端融合部分,用亲和层析吸附N端融合肽,每克湿菌体可获得纯度99%的Exendin-4 1.59 mg。腹腔注射糖尿病基因小鼠,急性实验显示,血糖浓度下降极显著,最佳用量为7μg/kg,注射后4 h血糖降低达51.93%,降糖作用持续8h;长效实验表明,用量为10ug/kg时,Exendin-4可持续降低血糖,糖化血红蛋白下降13.51%,同时,甘油三酯浓度有所下降。
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