钙网织蛋白在胃癌组织及胃癌细胞株中的表达及其意义

来源 :广州医学院 广州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xinhongwei678
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目的:  胃癌是国内最常见的消化道恶性肿瘤之一,其发生、发展是多因素、多阶段的过程,浸润与转移是近年来胃癌患者治疗效果无明显改善的主要原因。探讨胃癌发生发展机制对指导胃癌临床诊治、改善患者预后有十分重要的意义。钙网织蛋白(Calreticulin,CRT)是内质网和肌浆网中主要的Ca2+结合蛋白,与多种肿瘤的生长和转移密切相关,目前CRT在胃癌中的表达及其与胃癌发生转移的关系尚不明确。本研究分别从组织及细胞两个层面上检测CRT的mRNA及蛋白在胃癌及非癌正常胃粘膜的表达情况,探讨CRT的表达与胃癌发生、发展的关系,为胃癌的基因治疗提供新的生物学靶点。  方法:  本实验研究分两部分:  1.收集广州医学院附属广州市第一人民医院2009年4月至2010年8月外科手术切除并经病理确诊的44例新鲜胃癌组织及非癌正常胃组织(术前均未接受任何抗肿瘤治疗),采用SYBR Green I实时荧光定量PCR和免疫组化方法检测CRT的mRNA及蛋白在胃癌组织及癌旁正常胃组织中的表达情况,并结合性别、年龄、组织学类型、临床分期、肿瘤大小、淋巴结转移等临床病理因素,分析它们表达的相关性,探讨它们之间的关系及其在肿瘤发生转移中的作用。  2.正常胃粘膜上皮细胞株 GES-1及3种胃癌细胞株(高分化胃腺癌细胞株MKN28、中分化胃腺癌细胞株SGC-7901、低分化胃腺癌细胞株BGC-823)培养于含胎牛血清的RPMI-1640培养液中,采用实时荧光定量PCR及细胞免疫荧光结合激光扫描共聚焦显微镜技术检测 CRT基因在3种不同分化胃癌细胞株及正常胃粘膜上皮细胞株的表达情况,从细胞分子层面上探讨 CRT在人胃癌细胞株和正常胃粘膜细胞株表达上的差异。  结果:  1.(1)胃癌组织中CRT的mRNA表达水平(M=36.4998)低于正常胃组织(M=48.1902,P=0.031),在有淋巴结转移的胃癌组织中的表达(M=29.2200)显著低于无淋巴结转移的胃癌组织(M=67.8500,P=0.023),高分化癌CRT的mRNA表达(M=152.240)明显高于中分化癌(M=36.7600)、低分化癌(M=31.1550)(P=0.009)。CRT基因的mRNA表达与性别、年龄及肿瘤大小、TNM分期无明显相关(P>0.05)。(2)CRT蛋白主要定位于细胞浆中,在胃癌组织中其阳性表达率明显低于癌旁组织(34.09%vs77.27%,P=0.000),其中CRT蛋白的表达与患者的年龄、性别、肿瘤大小、TNM分期无相关性(P>0.05),而与肿瘤分化程度、淋巴结转移有关(P<0.05)。  2.CRT mRNA在4种细胞系均有表达,与正常胃黏膜上皮细胞相比,高、中、低分化胃癌细胞株中CRT mRNA的表达量均下调,表达强度依次为GES-1>MKN28>SGC-7901>BGC-823(P=0.000);细胞免疫荧光染色显示CRT蛋白主要表达在细胞浆中,在4种细胞系中随着胃癌细胞分化程度的降低其表达水平逐渐减少(P=0.000)。  结论:  1.CRT在胃癌组织中低表达,与淋巴结转移、胃癌分化程度密切相关。  2.胃癌细胞株中CRT的表达下调,且分化程度越差其表达水平越低。  3.CRT是一项有潜在价值的胃癌相关标记物,有希望成为胃癌基因治疗新的生物学靶点。
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